Karioting

Za študij kromosomov se pogosto uporabljajo kratkotrajne krvne kulture, kot tudi celice kostnega mozga in kulture fibroblasta. Krv, ki se v laboratorij dodaja antikoagulantu, se centrifugira za precipitacijo rdečih krvničk in leukociti inkubirajo v kulturi med 2-3 dni. V krvni vzorec se doda phytohemagglutinin, saj pospešuje aglutinacijo eritrocitov in spodbuja razdelitev limfocitov. Najbolj primerna faza za preučevanje kromosomov je metafaza mitoze, zato se kolhicin uporablja za preprečitev delitve limfocitov v tej fazi. Dodajanje tega zdravila k kulture privede do povečanja deleža celic, ki so v metafazi, to je na stopnji celičnega cikla, ko so kromosomi najbolje vidni. Vsak kromosom ponavlja (proizvaja svojo kopijo) in po ustrezni barvi je viden v obliki dveh kromatidov, pritrjenih na centromere ali osrednje zožitve. Celice nato obdelamo s hipotonično raztopino natrijevega klorida, fiksno in obarvano.

Za barvanje kromosomov se pogosteje uporablja barvilo Romanovsky-Giemsa, 2% acetaminomina ali 2% acetazarina. V celoti, enakomerno obarvajo kromosome (rutinska metoda) in jih lahko uporabimo za identifikacijo numeričnih anomalij človekovih kromosomov.

Za podrobnejšo sliko strukture kromosomov, identifikacijo (določanje) posameznih kromosomov ali njihovih segmentov se uporabljajo različne metode diferencialnega barvanja. Najpogosteje uporabljane metode so Giemsa, kot tudi G- in Q-upogibanje. Mikroskopski pregled zdravila po dolžini kromosoma razkriva vrsto obarvanih (heterochromatin) in neobesavljenih (evhromatinskih) pasov. Znak prečnega prečnega prereza, ki ga dobimo v tem primeru, omogoča identifikacijo vsakega kromosoma v množici, saj sta zamenjava črt in njihova velikost strogo individualna in konstantna za vsak par.

Metafazne plošče posameznih celic se fotografirajo. Posamezni kromosomi so izrezani iz fotografij in narejeni na list papirja; Takšna slika kromosomov se imenuje kariotip.

Uporaba dodatnega barvanja in nove metode za pridobivanje kromosomskih pripravkov, ki omogočajo raztezanje kromosomov v dolžini, znatno povečajo natančnost citogenetske diagnostike.

Za opis človeškega kariotipa je bila razvita posebna nomenklatura. Normalni kariotip moškega in ženske je označen kot 46, XY in 46, XX. Ko Downov sindrom značilna po prisotnosti dodatnega kromosoma 21 (trisomijo 21), ženska je opisan kot kariotip 47, XX 21+ moški - 47, XY, 21+. V prisotnosti strukturne anomalije kromosoma je treba navesti spremenjeno dolgo ali kratko roko: črka p pomeni kratko roko, q dolga roka in t translokacijo. Tako, ko se črta kratka roka kromosoma 5 (sindrom "cat-scream"), je ženski kariotip opisan kot 46, XX, 5p-. Mati otroka s translokacijo Downov sindrom - nosilec uravnotežene translokacije 14/21 ima kariotip 45, XX, t (14q, 21q). Kromosom translokacije se tvori, ko se dolgi kraki kromosoma 14 in 21 združita, kratka ramena pa se izgubita.

Vsako ramo je razdeljeno na okrožja, nato pa na segmente, tiste in druge pa so označene z arabskimi številkami. Centromera kromosoma je izhodišče za štetje regij in segmentov.

Tako se za topografijo kromosomov uporabljajo štirje označevalci: število kromosomov, simbol ramen, številka območja in številka segmenta v danem območju. Na primer, 6p21.3 zapis pomeni, da govorimo o 6. Kromosomov par, kratke roke, območje 21, odsek 3. Tam so več dodatnih znakov, zlasti pter - na koncu kratke roke, qter - konec dolge roke.

Metoda citogenetskih raziskav omogoča odkrivanje delecij in drugih sprememb kromosomov le v velikosti približno 1 milijona baz (nukleotidov).

[1], [2], [3], [4]