Kariotipizacija

Za preučevanje kromosomov se najpogosteje uporabljajo kratkotrajne krvne kulture, celice kostnega mozga in fibroblastne kulture. Kri z antikoagulantom, dostavljena v laboratorij, se centrifugira, da se eritrociti usedejo, levkociti pa se 2-3 dni inkubirajo v gojišču. Vzorcu krvi se doda fitohemaglutinin, saj pospeši aglutinacijo eritrocitov in spodbudi delitev limfocitov. Najprimernejša faza za preučevanje kromosomov je metafaza mitoze, zato se za zaustavitev delitve limfocitov v tej fazi uporablja kolhicin. Dodajanje tega zdravila kulturi povzroči povečanje deleža celic v metafazi, torej v fazi celičnega cikla, ko so kromosomi najbolj vidni. Vsak kromosom se replicira (proizvede svojo kopijo) in je po ustreznem barvanju viden kot dve kromatidi, pritrjeni na centromer oziroma centralno zožitev. Celice se nato obdelajo s hipotonično raztopino natrijevega klorida, fiksirajo in obarvajo.

Za barvanje kromosomov se najpogosteje uporabljajo barvilo Romanovsky-Giemsa, 2 % acetarmin ali 2 % acetarsein. Kromosome obarvajo v celoti, enakomerno (rutinska metoda) in se lahko uporabijo za odkrivanje numeričnih anomalij človeških kromosomov.

Za pridobitev podrobne slike strukture kromosomov, identifikacijo (določitev) posameznih kromosomov ali njihovih segmentov se uporabljajo različne metode diferencialnega barvanja. Najpogosteje uporabljene metode so Giemsa, pa tudi G- in Q-barvanje. Pri pregledu preparata z mikroskopijo vzdolž dolžine kromosoma se razkrijejo številni obarvani (heterokromatin) in neobarvani (evkromatin) pasovi. Narava prečnega črtanja, pridobljenega na ta način, omogoča identifikacijo vsakega kromosoma v nizu, saj sta menjava pasov in njihove velikosti strogo individualni in konstantni za vsak par.

Metafazne plošče posameznih celic se fotografirajo. Posamezni kromosomi se izrežejo iz fotografij in jih po vrsti nalepijo na list papirja; ta slika kromosomov se imenuje kariotip.

Uporaba dodatnega barvanja, pa tudi nove metode za pridobivanje kromosomskih pripravkov, ki omogočajo raztezanje kromosomov v dolžino, znatno povečajo natančnost citogenetske diagnostike.

Za opis človeškega kariotipa je bila razvita posebna nomenklatura. Normalni kariotip moškega in ženske je označen kot 46, XY oziroma 46, XX. Pri Downovem sindromu, za katerega je značilna prisotnost dodatnega kromosoma 21 (trisomija 21), je kariotip ženske opisan kot 47, XX 21+, kariotip moškega pa kot 47, XY, 21+. V prisotnosti strukturne anomalije kromosoma je treba navesti spremenjen dolgi ali kratki krak: črka p označuje kratki krak, q označuje dolgi krak in t označuje translokacijo. Tako je v primeru delecije kratkega kraka kromosoma 5 (sindrom cri du chat) ženski kariotip opisan kot 46, XX, 5p-. Mati otroka s translokacijskim Downovim sindromom, nosilka uravnotežene translokacije 14/21, ima kariotip 45, XX, t(14q; 21q). Translokacijski kromosom nastane z zlitjem dolgih krakov kromosomov 14 in 21, kratki kraki pa se izgubijo.

Vsak krak je razdeljen na regije, ki so nato razdeljene na segmente, ki sta označena z arabskimi številkami. Centromera kromosoma je izhodišče za štetje regij in segmentov.

Za topografijo kromosomov se tako uporabljajo štiri oznake: število kromosoma, simbol kraka, številka regije in številka segmenta znotraj regije. Na primer, vnos 6p21.3 pomeni, da govorimo o kromosomu 6 6. para, njegovem kratkem kraku, regiji 21, segmentu 3. Obstajajo tudi dodatni simboli, zlasti pter - konec kratkega kraka, qter - konec dolgega kraka.

Citogenetska metoda raziskovanja omogoča odkrivanje delecij in drugih sprememb v kromosomih, velikih le približno 1 milijon baz (nukleotidov).

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]