Vitamin A v krvi

Referenčne vrednosti (norma) za koncentracijo vitamina A (retinola) v krvnem serumu: pri otrocih, starih 1-6 let - 0,7-1,5 μmol/l, 7-12 let - 0,91-1,71 μmol/l, 13-19 let - 0,91-2,51 μmol/l; pri odraslih - 1,05-2,09 μmol/l.

Vitamin A je vitamin, topen v maščobah, in obstaja v dveh oblikah: vitamin A sam ali retinol (najdemo ga le v živalskih proizvodih) in provitamin A, znan kot karoten (pridobiva se iz živalskih in rastlinskih proizvodov), ki se lahko v stenah prebavnega trakta pretvori v retinol. Približno 50–90 % prehranskega retinola se absorbira v tankem črevesu in se v kompleksu, vezanem na hilomikrone, prenese v jetra, kjer se shrani kot retinol palmitat. Po potrebi se sprosti v krvni obtok kot retinol, vezan na protein, ki veže vitamin A. V krvnem serumu se kompleks proteina, ki veže vitamin A, in retinola veže na transtiretin. Iz krvnega seruma retinol prevzamejo ciljne celice, kot so fotoreceptorji mrežnice in epitelija.

Ko telo prejme vitamin A v količinah, ki presegajo potrebe (180–430 mcg retinola na dan, odvisno od starosti, spola in fiziološkega stanja), se njegov presežek odloži v jetrih in tvori depo tega vitamina. Ko se vnos retinola s hrano zmanjša, se njegove rezerve iz jeter sprostijo v krvni obtok, kar ohranja koncentracijo retinola v krvnem serumu na normalni ravni (nad 0,7 μmol/l). Druge biološko aktivne oblike vitamina A (retinal in retinojska kislina) so v krvi prisotne v zelo nizkih koncentracijah (pod 0,35 μmol/l); estri retinola predstavljajo približno 5 % celotnega vitamina A (0,1–0,17 μmol/l).

Vitamin A ima pomembno vlogo v oksidacijsko-redukcijskih procesih. Retinol spodbuja nastajanje glikogena v jetrih in mišicah, pomaga povečati vsebnost holesterola v krvi in sodeluje pri sintezi steroidnih in spolnih hormonov. Potreben je za rast in nastanek skeletnega sistema, resintezo rodopsina, spodbuja pa tudi normalno delovanje sluznic in pokrovnega epitelija kože, preprečuje njeno metaplazijo, hiperkeratozo in prekomerno luščenje. Vitamin A pomaga krepiti lase, zobe in dlesni. V zadnjih letih se je pokazala raznolika vloga vitamina A pri preprečevanju raka in uravnavanju imunosti (potreben je za dokončanje fagocitoze, povečuje sintezo imunoglobulinov, spodbuja nastajanje T-ubijalcev, spodbuja T-pomožne celice tipa II itd.). Vitamin A je aktiven antioksidant, ki deluje predvsem v prisotnosti vitamina E; ščiti vitamin C pred oksidacijo. Pomanjkanje vitamina A velja za dejavnik tveganja za maligne neoplazme. Eksperimentalne študije so pokazale, da povečanje vsebnosti vitamina A v prehrani poveča mediano pričakovano življenjsko dobo za 17,5 %. Cink je bistveni kofaktor pri presnovi vitamina A (potreben za sintezo beljakovin, ki vežejo vitamin A).

Povprečna dnevna potreba po retinolu za odrasle (20–50 let) je 1,2 mg (4000 ie, 1 ie je enakovredna 0,3 mcg retinola), za nosečnice – 1,5 mg (5000 ie), za doječe matere – 1,8 mg (6000 ie), za osebe, starejše od 60 let – 2,5 mg (10.000 ie). Vsaj tretjino dnevne potrebe po retinolu je treba telesu zagotoviti v končni obliki; preostanek lahko pokrijemo z uživanjem karotenoidov, iz katerih se retinol tvori v telesu. Upoštevati je treba, da se približno 30 % retinola v živilih med toplotno obdelavo uniči. Aktivnost retinola je 2-krat večja kot pri karotenu, poleg tega se le 30–40 % slednjega absorbira v črevesju. Zato pri ocenjevanju prehrane velja, da je 1 mg retinola približno enakovreden 6 mg karotenoidov.

Določanje retinola (vitamina A) in karotenoidov v krvnem serumu po Besseyju, kot ga je spremenila L. A. Anisimova

Načelo metode

Določanje vitamina A in karotenoidov temelji na njihovi hidrolizi v alkalni alkoholni raztopini, ki ji sledi ekstrakcija z mešanico organskih topil.

Reagenti

• 11 M raztopina kalijevega hidroksida (KOH).
• 96 % etilnega alkohola.
• 1 M raztopina kalijevega hidroksida (KOH) v 96 % etilnem alkoholu: 1 volumen 11 M raztopine KOH se zmeša z 10 volumenskimi enotami 96 % etilnega alkohola. Reagent se pripravi na dan študije. Če se med mešanjem pojavi obarvanost, je treba alkohol pred uporabo prečistiti z destilacijo.
• Ksilen, kemično čist
• Oktan, kemično čist
• Zmes ksilena in oktana: pripravljena z mešanjem enakih volumnov ksilena in oktana.

Študije se izvajajo s spektrofotometrom.

Postopek določanja vitamina A

Kri, odvzeta iz prsta (približno 1 ml), se prenese v centrifugalno epruveto in nato za 20–30 minut postavi v stekleno skodelico s toplo vodo (temperatura 40–45 °C). Za ločitev seruma se krvni strdek previdno potegne ob robu sten epruvete s tanko stekleno palčko in centrifugira pri 3000 vrt/min 10 minut.

Odvzame se 0,12 ml seruma in prenese v aglutinacijsko epruveto, kamor se nato doda 0,12 ml 1 M raztopine kalijevega hidroksida v alkoholu. Vsebino dobro pretresemo.

Epruvete z vzorci postavimo v vodno kopel za 20 minut pri temperaturi 60 °C, da se izvede hidroliza.

Vzorce ohladimo in jim dodamo 0,12 ml mešanice ksilen-oktana ter jih močno stresamo 10–15 sekund. Ponovno jih ohladimo in centrifugiramo.

Zgornjo plast, ki vsebuje vitamin A in karotenoide, previdno odstranimo s Pasteurjevo pipeto z gumijasto bučko in jo prenesemo v mikrokivete.

Vzorci se spektrofotometrično določajo pri valovni dolžini 328 nm za določanje vitamina A in pri valovni dolžini 460 nm za določanje karotenoidov.

Po spektrofotometriji vzorce izpostavimo ultravijoličnemu sevanju, da uničimo vitamin A. V ta namen namestimo kremenčevo (baktericidno) svetilko na razdalji 15–20 cm od mikrokivet, tako da je del kivete, napolnjen s tekočino, izpostavljen sevanju; čas obsevanja je 45–60 min.

Vzorci se ponovno spektrofotometrično analizirajo pri valovni dolžini 328 nm. Vsebnost vitamina A se določi z razliko v vrednostih ekstinkcije (optična gostota) ob upoštevanju koeficienta (faktorja) 637, ki ga je za vitamin A izračunal Bessey.

Izračun se izvede po formuli:

X = 637 × (E328(1) - E328(2)),

Kjer je X vsebnost vitamina A, μg/dl; 637 je koeficient, izračunan po Besseyju za določanje vitamina A; E328(1) je optična gostota raztopine pred obsevanjem; E328(2) je optična gostota raztopine po obsevanju.

Koeficient za pretvorbo koncentracije vitamina A iz µg/dL v µmol/L je 0,035.

Vsebnost karotenoidov se izračuna po formuli:

X = 480-E480,

Kjer je X vsebnost karotenoidov, μg/dl; 480 je koeficient, izračunan po Besseyju za določanje karotenoidov; E480 je optična gostota preskusne raztopine.

Opomba

Po Besseyju se pri izvajanju raziskav lahko uporabi večji ali manjši volumen seruma, vendar mora biti njegovo razmerje z volumnom alkoholne raztopine konstantno pri vsaki spremembi volumna (količine) mešanice ksilen-oktan.

Normalna vsebnost vitamina A v krvnem serumu je: pri novorojenčkih in dojenčkih - 160-270 μg/l; pri odraslih - 1,05-2,45 μmol/l (300-700 μg/l). Vsebnost karotenoidov v krvnem serumu odraslih je 800-2300 μg/l.