Agregacija trombocitov z ristocetinom (von Willebrandov faktor )

Referenčne vrednosti (norma) aktivnosti von Willebrandovega faktorja so 58–166 %.

Von Willebrandov faktor sintetizirajo endotelijske celice in megakariociti. Potreben je za normalno adhezijo trombocitov in ima sposobnost podaljšanja razpolovne dobe faktorja VIII. Plazemski koagulacijski faktor VIII – antihemofilni globulin A – kroži v krvi kot kompleks treh podenot, imenovanih VIII-k (koagulacijska enota), VIII-Ag (glavni antigenski marker) in VIII-vWF (von Willebrandov faktor, povezan z VIII-Ag). Domneva se, da von Willebrandov faktor uravnava sintezo koagulacijskega dela antihemofilnega globulina A (VIII-k) in sodeluje pri žilno-trombocitni hemostazi.

Von Willebrandova bolezen je dedna motnja, za katero so značilni podaljšan čas krvavitve, zmanjšana aktivnost ristocetinskega kofaktorja in zmanjšana (v različni stopnji) koagulacijska aktivnost faktorja VIII. Klinične manifestacije bolezni so podobne tistim pri trombocitopatiji. Vendar pa se pri bolnikih s pomembno zmanjšano aktivnostjo faktorja VIII lahko pojavijo hematomi in hemartroza.

Na podlagi laboratorijskih študij, ki nam omogočajo določitev strukture in aktivnosti von Willebrandovega faktorja, ločimo naslednje oblike bolezni.

• Za tip I (70 % vseh primerov) je značilno rahlo zmanjšanje kofaktorja ristocetina (von Willebrandov faktor) in koagulantne aktivnosti (VIII-k) z normalno makromolekularno strukturo von Willebrandovega faktorja.
• Tip II: temelji na selektivnem pomanjkanju visokomolekularnih polimerov von Willebrandovega faktorja zaradi motenj v strukturi te beljakovine.
  • Tip IIB povzroča povečana interakcija med von Willebrandovim faktorjem in trombociti, povečan očistek agregatov trombocitov pa vodi v trombocitopenijo.
• Za tip III je značilno hudo kvantitativno pomanjkanje von Willebrandovega faktorja, kar povzroči klinično pomembno zmanjšanje aktivnosti faktorja VIII (VIII-k).

Vsebnost von Willebrandovega faktorja se določa v primerih, ko je čas krvavitve podaljšan, število trombocitov je znotraj referenčnih vrednosti in ni očitnih vzrokov za disfunkcijo trombocitov. Za oceno von Willebrandovega faktorja se določi kvantitativna vsebnost von Willebrandovega faktorja (študija aktivnosti kofaktorja ristocetin), preučuje se z ristocetinom povzročena aglutinacija trombocitov in antigena struktura von Willebrandovega faktorja, povezanega s faktorjem VIII (VIII-vWF).

Za kvantitativno oceno von Willebrandovega faktorja se uporablja določanje agregacije trombocitov z ristocetinom v plazmi. Ugotovljena je bila linearna povezava med stopnjo agregacije ristocetina in količino von Willebrandovega faktorja. Metoda temelji na sposobnosti tega antibiotika (ristocetina), da in vitro stimulira interakcijo von Willebrandovega faktorja s trombocitnim glikoproteinom Ib. V večini primerov von Willebrandove bolezni opazimo oslabljeno agregacijo ristocetina ob normalnem odzivu na ADP, kolagen in adrenalin. Oslabljena agregacija ristocetina se odkrije tudi pri makrocitni trombodistrofiji Bernard-Soulierjevega tipa (odsotnost receptorjev za agregacijo ristocetina na membrani trombocitov). Za diferenciacijo se uporablja test z dodatkom normalne plazme: pri von Willebrandovi bolezni se agregacija ristocetina normalizira po dodatku normalne plazme, medtem ko se to pri Bernard-Soulierjevem sindromu ne zgodi.

Študija se lahko uporabi tudi pri diferencialni diagnozi hemofilije A (pomanjkanje faktorja VIII) in von Willebrandove bolezni. Pri hemofiliji je vsebnost VIII-k močno zmanjšana, vsebnost VIII-fB pa je v normalnem območju. Klinično se ta razlika kaže v tem, da se pri hemofiliji pojavi povečana krvavitev v obliki hematoma, pri von Willebrandovi bolezni pa v obliki petehialnega hematoma.

Z ristocetinom povzročena aglutinacija trombocitov je zmanjšana v večini primerov von Willebrandove bolezni, razen pri tipu IIB.

Antigeno strukturo von Willebrandovega faktorja, povezanega s faktorjem VIII (VIII-vWF), ugotavljamo z različnimi imunološkimi metodami, porazdelitev von Willebrandovega faktorja glede na molekularno velikost pa določamo z elektroforezo v agaroznem gelu. Ti testi se uporabljajo za ugotavljanje vrste von Willebrandove bolezni.

Študija agregacije trombocitov z različnimi induktorji se ne izvaja le za ugotavljanje motenj funkcij agregacije trombocitov. Ta študija omogoča oceno učinkovitosti antitrombotičnega zdravljenja, izbiro individualnih odmerkov zdravil in spremljanje zdravil.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ], [ 10 ], [ 11 ]