Testiranje občutljivosti na antibiotike: priprava, dešifriranje, koliko se naredi

Danes postaja testiranje občutljivosti na antibiotike vse bolj priljubljeno. Človeška mikroflora je precej raznolika, saj jo predstavlja veliko število mikroorganizmov v različnih biotopih.

Farmacevtska podjetja so razvila veliko število antibakterijskih sredstev, antibiotikov, ki pomagajo vzdrževati normalno razmerje in število mikrobnih populacij. Z nastopom antibiotične dobe so bile ozdravljene številne bolezni, ki so prej veljale za smrtne. Toda tudi mikroorganizmi si prizadevajo preživeti in se postopoma prilagajajo delovanju antibakterijskih zdravil. Sčasoma so mnogi med njimi pridobili odpornost na številna zdravila, jo utrdili v genotipu in jo začeli prenašati iz roda v rod. Tako so novi mikroorganizmi sprva neobčutljivi na določena zdravila in njihova uporaba je lahko neučinkovita. Farmacevti razvijajo vedno več novih izdelkov, jim dodajajo nove aktivne sestavine in spreminjajo osnovno formulo. Postopoma pa se razvije tudi odpornost nanje.

Razlog za povečano odpornost mikroflore na številna zdravila in celo njihove analoge se pogosto skriva v nepravilni in nenadzorovani uporabi antibiotikov. Zdravniki predpisujejo antibiotike in njihove kombinacije za različne bakterijske bolezni. Hkrati ni predhodne ocene njihove učinkovitosti, ni izbran optimalni odmerek, kar je zelo pomembno tako za zdravljenje kot za preprečevanje mehanizmov razvoja nadaljnje odpornosti. Mnogi ljudje zmotno predpisujejo antibakterijsko terapijo tudi za virusne bolezni, ki je neučinkovita, saj antibiotik ne deluje proti virusom.

Terapija se pogosto predpiše brez predhodnega testiranja občutljivosti, brez izbire aktivne snovi in potrebnega odmerka za vsako specifično bolezen in biotop. Ker se antibiotiki predpisujejo "na slepo", se pogosto zgodi, da ne kažejo nobene aktivnosti proti mikroorganizmom, ki so povzročili bolezen in katerih število je treba zmanjšati. Namesto tega vplivajo na druge predstavnike mikroflore, kar povzroči disbakteriozo, ki je prav tako precej nevarna patologija in lahko povzroči resne posledice. Posebej nevarni so primeri, ko antibiotik uniči normalno mikrofloro, ki je namenjena zaščiti telesa in ohranjanju njegovega normalnega delovanja. Obstajajo tudi primeri, ko je predpisanega preveč ali premalo zdravila.

Bolniki so tudi neodgovorni glede zdravljenja. Pogosto se zdravljenje prekine, ko simptomi bolezni prenehajo motiti. Hkrati mnogi raje ne zaključijo celotnega cikla zdravljenja. To je eden od dejavnikov, ki prispevajo k razvoju odpornosti bakterij. Celoten cikel zdravljenja je zasnovan tako, da popolnoma uniči patogeno mikrofloro. Če cikel zdravljenja ni zaključen, ni popolnoma uničen. Tisti mikroorganizmi, ki preživijo, so podvrženi mutacijam, razvijejo mehanizme, ki jim zagotavljajo zaščito pred tem zdravilom, in ga prenesejo na naslednje generacije. Nevarnost je, da se odpornost razvije ne le v zvezi s tem specifičnim zdravilom, temveč tudi v zvezi s celotno skupino zdravil.

Zato je danes eno najučinkovitejših sredstev racionalne terapije in preprečevanja odpornosti predhodna določitev občutljivosti na predpisano zdravilo in izbira njegovega optimalnega odmerka.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ]

Indikacije za postopek testi občutljivosti na antibiotike

Običajno je treba takšno analizo opraviti v vseh primerih, ko je potrebna antibakterijska terapija. Na podlagi osnovnih zakonov antibiotične terapije se lahko kateri koli antibiotik predpiše šele po predhodni oceni občutljivosti mikroflore na to sredstvo in določitvi optimalne koncentracije aktivne snovi v laboratorijskih pogojih. V praksi se zaradi različnih razlogov in okoliščin takšna študija ne izvaja pred začetkom zdravljenja, zdravnik pa je prisiljen izbrati zdravilo "naključno".

Danes se testiranje občutljivosti izvaja le v primerih, ko ima zdravnik resne dvome o učinkovitosti predpisanega zdravila, v primerih dolgotrajne odsotnosti učinka zdravila in tudi pri večkratni uporabi istega zdravila v omejenem časovnem obdobju. Občutljivost se pogosto ugotavlja pri zdravljenju spolno prenosljivih bolezni. Mnogi specialisti se zatekajo k analizi v primeru neželenih učinkov, alergijskih reakcij in kadar je treba eno zdravilo zamenjati z drugim.

Analiza se pogosto uporablja tudi za izbiro zdravil za antibakterijsko terapijo v obdobju okrevanja po operacijah, laparoskopskih posegih in odstranitvi organov. Na oddelkih za kirurgijo in gnojno kirurgijo je takšna študija preprosto potrebna, saj se tukaj odpornost razvije precej hitro. Poleg tega se razvijejo superrezistentne "bolnišnične" bolezni. Številne zasebne klinike k predpisovanju zdravil pristopajo s polno odgovornostjo - šele po preverjanju občutljivosti. V mnogih primerih proračun državnih ustanov preprosto ne omogoča izvedbe takšnih študij za vsakega pacienta, ki potrebuje antibakterijsko terapijo.

[ 9 ], [ 10 ], [ 11 ]

Priprava

Priprava na študijo ne zahteva posebnih ukrepov. Je enaka kot pri vseh testih. Nekaj dni pred študijo se je treba vzdržati pitja alkohola. Zjutraj, na dan odvzema materiala, v večini primerov ne smete jesti ali piti. Vse pa je odvisno od vrste analize. Material za študijo se lahko razlikuje, odvisno od bolezni.

Pri boleznih grla in dihal se odvzame bris grla in nosu. V venerologiji, ginekologiji, urologiji se za analizo odvzamejo brisi genitalij in kri. Pri boleznih ledvic je pogosto potreben urin. Pri boleznih prebavil in nekaterih nalezljivih boleznih se pregleda blato in bruhanje. Včasih se lahko pregleda materino mleko, izcedek iz nosu, izloček iz oči, slina in sputum. V primeru hujših patologij in suma na infekcijski proces se pregleda celo cerebrospinalna tekočina. Spekter je precej širok.

Značilnosti odvzema materiala so določene z njegovo biološko pripadnostjo. Tako se urin in blato zjutraj odvzameta v čisto posodo ali v posebno posodo za biološki material. Materino mleko se odvzame pred hranjenjem. Srednji del se odvzame za pregled. Razmaz se odvzame s posebnim brisom, ki se potegne po sluznici in nato spusti v epruveto s pripravljenim medijem. Kri se odvzame v epruveto, iz prsta ali vene. Pri odvzemu razmazov iz sečnice ali nožnice je priporočljivo, da se nekaj dni vzdržite spolnih odnosov.

Pri zbiranju biološkega materiala za raziskave je treba najprej zagotoviti pravilnost odvzema in sterilnost. Toda v večini primerov je to skrb zdravstvenega osebja, pacient se o tem ne bi smel bati. Najpogosteje se na takšne študije obračajo ginekologi in urologi, na drugem mestu pa otorinolaringologi pri zdravljenju bolezni nazofarinksa in žrela ter zgornjih dihal.

[ 12 ], [ 13 ], [ 14 ]

Tehnika testi občutljivosti na antibiotike

Zbrani biološki material se v sterilnih pogojih dostavi v laboratorij, kjer se izvedejo nadaljnje raziskave. Najprej se izvede njegova primarna setev na univerzalna hranilna gojišča. Del materiala se odvzame tudi za mikroskopski pregled. Pripravi se razmaz za mikroskopijo, izvede se študija, s pomočjo katere je mogoče določiti približno sliko in domnevati, kateri mikroorganizmi so prisotni v vzorcu. To omogoča izbiro najoptimalnejših okolij za nadaljnje raziskave in identifikacijo mikroorganizmov. Pri mikroskopiji je mogoče videti tudi znake, ki kažejo na vnetje in onkološki proces.

V nekaj dneh kolonije mikroorganizmov rastejo v petrijevki. Nato se odvzame več kolonij in jih prenese na selektivna hranilna gojišča, ki omogočajo določitev približne skupine mikroorganizmov. Več dni se inkubirajo v termostatu, nato pa se začne identifikacija (določanje vrste mikroorganizma). Identifikacija se izvaja s posebnimi biokemičnimi in genetskimi testi, identifikatorji. Poleg tega se lahko izvedejo imunološke študije.

Po izolaciji glavnega patogena se oceni njegova občutljivost na antibiotike. Za to obstaja več metod. Najpogosteje uporabljena metoda je serijsko redčenje ali metoda diskne difuzije. Metode so podrobno opisane v mikrobioloških priročnikih, smernicah in laboratorijskih standardih.

Bistvo metode diskovne difuzije je, da se identificirani mikroorganizmi zasejejo na hranilni medij, na katerega se namestijo posebni diski, prepojeni z antibiotiki. Setva se nekaj dni inkubira v termostatu, nato pa se izmerijo rezultati. Oceni se stopnja zaviranja rasti bakterij, ki jo povzroči vsak antibiotik. Če je bakterija občutljiva na antibiotik, se okoli diska oblikuje "cona lize", v kateri se bakterije ne razmnožujejo. Njihova rast je počasna ali pa je sploh ni. Premer cone zaviranja rasti se uporablja za določitev stopnje občutljivosti mikroorganizmov na antibiotik in oblikovanje nadaljnjih priporočil.

Metoda serijskega redčenja je najbolj natančna. Pri tem se mikroorganizmi zasejejo na tekoča hranilna gojišča, doda se antibiotik, razredčen po decimalnem sistemu redčenja. Nato se epruvete za več dni inkubirajo v termostatu. Občutljivost na antibiotike se določi s stopnjo rasti bakterij v hranilni juhi z dodatkom antibiotikov. Zabeleži se minimalna koncentracija, pri kateri mikroorganizmi še rastejo. To je minimalni odmerek zdravila (potreben je preračun iz mikrobioloških enot na aktivno snov).

To so standardne mikrobiološke metode, ki so osnova vsake raziskave. Predpostavljajo ročno izvajanje vseh manipulacij. Danes so številni laboratoriji opremljeni s posebno opremo, ki vse te postopke izvaja samodejno. Specialist, ki dela s takšno opremo, potrebuje le sposobnost dela z opremo ter upoštevanje varnostnih predpisov in pravil sterilnosti.

Upoštevati je treba, da se indeksi občutljivosti v laboratorijskih pogojih in v živih organizmih močno razlikujejo. Zato se osebi predpiše višji odmerek, kot je določen med študijo. To je posledica dejstva, da telo nima tako optimalnih pogojev za rast bakterij. V laboratoriju se ustvarijo "idealni pogoji". Del zdravila se lahko nevtralizira z delovanjem sline in želodčnega soka. Del se v krvi nevtralizira s protitelesi in antitoksini, ki jih proizvaja imunski sistem.

Test občutljivosti na antibiotike v urinu

Najprej se zbere biološki material. Za to je treba zbrati srednji del jutranjega urina in ga dostaviti v laboratorij. Pomembno je ohraniti sterilnost in nekaj dni pred analizo ne jemati antibiotikov, sicer lahko dobite lažno negativen rezultat. Po tem se izvede standardni setev, katere bistvo je izolacija čiste kulture patogena in izbira antibiotika, ki bo imel nanj optimalen baktericidni učinek. Določi se potrebna koncentracija antibiotika.

Analiza urina se najpogosteje predpiše, kadar obstaja sum na infekcijsko-vnetni proces v genitourinarnem sistemu, z imunskimi pomanjkljivostmi in presnovnimi motnjami. Običajno je urin sterilna tekočina. Trajanje takšne študije je 1-10 dni in je odvisno od stopnje rasti mikroorganizma.

Testiranje kulture in občutljivosti na antibiotike

Študija vključuje izolacijo mikroorganizma, ki je patogen, v čisto kulturo. Včasih je lahko prisotnih več takih mikroorganizmov (mešana okužba). Nekateri mikroorganizmi so sposobni tvoriti biofilme, ki so nekakšne "mikrobne združbe". Stopnja preživetja biofilmov je veliko višja kot pri posameznih mikroorganizmih ali združbah. Poleg tega niso vsi antibiotiki sposobni vplivati na biofilm in vanj prodreti.

Za določitev patogena in njegovo izolacijo v čisto kulturo se izvede setev. Med študijo se izvede več setev v različnih hranilnih medijih. Nato se izolira čista kultura, določi se njena biološka pripadnost in občutljivost na antibakterijska zdravila. Izbere se optimalna koncentracija.

Za študijo se lahko uporabi kateri koli biološki material, odvisno od bolezni in lokalizacije infekcijskega procesa. Trajanje je določeno s hitrostjo rasti mikroorganizmov.

[ 15 ], [ 16 ], [ 17 ], [ 18 ], [ 19 ], [ 20 ]

Test občutljivosti blata

Blato se pregleda pri različnih želodčnih in črevesnih boleznih, v primeru suma na infekcijski proces, bakterijske zastrupitve, zastrupitve s hrano. Namen študije je izolacija patogena in izbira optimalnih antibakterijskih zdravil zanj, ki bodo imela visoko aktivnost. Pomen te vrste študije je v tem, da je mogoče izbrati zdravilo, ki bo vplivalo samo na patogena in ne bo vplivalo na predstavnike normalne mikroflore.

Prva in zelo pomembna faza je zbiranje blata. Zbrati ga je treba v posebno sterilno posodo zjutraj. Shranjevati ga je treba največ 1-2 uri. Ženske z menstruacijo naj analizo odložijo do konca, saj se bo natančnost rezultatov spremenila. Material se dostavi v laboratorij na testiranje. Analiza se izvede s standardnimi mikrobiološkimi tehnikami setve in izolacije čiste kulture. Izvede se tudi antibiogram. Na podlagi zaključka se razvijejo priporočila in določi nadaljnja shema študije.

[ 21 ], [ 22 ], [ 23 ], [ 24 ]

Analiza disbakterioze z občutljivostjo

Material za študijo je blato, odvzeto takoj po odvajanju blata. Normalna mikroflora prebavil je sestavljena iz predstavnikov normalne flore in več predstavnikov patogene flore. Njihova vrstna sestava, količina in razmerje so strogo določeni in se ohranjajo znotraj dovoljene norme. Če je to razmerje moteno, se razvije disbakterioza. Lahko se kaže na različne načine. Nalezljive bolezni se lahko razvijejo, če se količina patogene mikroflore močno poveča. Če se količina katerega koli mikroorganizma močno zmanjša, prosti prostor zasedejo drugi predstavniki, ki niso značilni za prebavila ali so patogeni. Pogosto prosti prostor zasede gliva, nato pa se razvijejo različne glivične okužbe in kandidiaza.

Za določitev kvantitativne in kvalitativne sestave črevesne mikroflore se opravi analiza blata za disbakteriozo. Običajno so vsi predstavniki, ki živijo v črevesju, razdeljeni v tri skupine: patogene, oportunistične in nepatogene. V skladu s tem je analiza sestavljena iz treh delov. Vsaka skupina mikroorganizmov ima svoje potrebe po viru hrane, energiji. Vsaka skupina potrebuje ločene hranilne medije in selektivne dodatke.

Najprej se izvede mikroskopija in primarna setev. Po setvi se izberejo največje kolonije, ki so po morfoloških značilnostih podobne predstavnikom vsake skupine. Prenesejo se v selektivna gojišča. Ko mikroorganizmi zrastejo, se identificirajo in takoj testirajo na občutljivost na antibiotike. Uporabljajo se standardne mikrobiološke metode.

Študija skupine patogenih mikroorganizmov poleg standardnih študij vključuje tudi določanje tifusnih, paratifusnih in grižnih bakterij. Ugotavlja se tudi, ali je oseba nosilec teh mikroorganizmov. Celovita študija disbakterioze vključuje tudi študijo predstavnikov skupine bifidobakterij in laktobacilov. Študija traja približno teden dni in je odvisna od stopnje rasti mikroorganizmov.

[ 25 ], [ 26 ], [ 27 ], [ 28 ], [ 29 ]

Testiranje občutljivosti na bakteriofage

V primeru črevesne okužbe se za zdravljenje namesto antibiotikov pogosto uporabljajo bakteriofagi. Bakteriofagi so bakterijski virusi, ki so dovzetni samo zanje. Najdejo bakterijo, s katero se dopolnjujejo, jo prodrejo in postopoma uničijo bakterijsko celico. Posledično se infekcijski proces ustavi. Vendar pa niso vse bakterije občutljive na bakteriofage. Da bi preverili, ali bo določen bakteriofag pokazal aktivnost proti predstavnikom mikroflore, je treba opraviti analizo.

Material za študijo je blato. Analizo je treba dostaviti v laboratorij v eni uri, sicer je ne bo mogoče izvesti. Analizo je treba izvesti v več ponovitvah. Začetna metoda je podobna tisti za določanje občutljivosti na antibiotike. Najprej se izvede predhodna mikroskopija vzorca, nato primarna setev na univerzalne hranilne gojišča. Nato se na selektivne hranilne gojišča izolira čista kultura.

Glavno delo se opravlja s čisto kulturo. Obdelujejo se z različnimi vrstami bakteriofagov. Če se kolonija raztopi (lizira), to kaže na visoko aktivnost bakteriofaga. Če je liza delna, bakteriofag deluje zmerno. Če lize ni, lahko govorimo o odpornosti na bakteriofag.

Prednost fagoterapije je, da bakteriofagi ne vplivajo na človeško telo in ne povzročajo stranskih učinkov. Vežejo se na določene vrste bakterij in jih lizirajo. Slabost je, da so zelo specifični in imajo selektiven učinek ter se ne morejo vedno pritrditi na bakterije.

[ 30 ], [ 31 ], [ 32 ], [ 33 ], [ 34 ], [ 35 ], [ 36 ], [ 37 ], [ 38 ]

Analiza sputuma za občutljivost na antibiotike

Analiza je preučevanje izločka iz spodnjih dihal. Cilj je določiti vrsto mikroorganizmov, ki delujejo kot povzročitelj bolezni. Izvede se tudi antibiogram. V tem primeru se določi občutljivost povzročitelja na antibiotike in izbere optimalna koncentracija. Uporablja se pri boleznih dihal.

Pregled sputuma in drugih vsebin pljuč in bronhijev je potreben za izbiro režima zdravljenja in za razlikovanje med različnimi diagnozami. Uporablja se za potrditev ali ovrženje prisotnosti tuberkuloze.

Najprej je treba pridobiti biološki material. Pridobimo ga lahko s kašljanjem, z izkašljevanjem ali z odvzemom iz sapnika med bronhoskopijo. Obstajajo posebni aerosoli, ki pospešujejo izkašljevanje. Pred odvzemom izpljunka je treba usta sprati z vodo, kar bo zmanjšalo stopnjo bakterijske kontaminacije ustne votline. Najprej je priporočljivo 3 globoko vdihniti in izkašljati. Izpljunek se lahko odvzame tudi z aspiracijo iz sapnika. V tem primeru se v sapnik vstavi poseben kateter. Med bronhoskopijo se v bronhialno votlino vstavi bronhoskop. V tem primeru se sluznica namaže z anestetikom.

Material se nato pošlje v laboratorij na testiranje. Izvede se standardni setev in mikroskopija. Nato se izolira čista kultura in z njo se izvedejo nadaljnje manipulacije. Izvede se antibiogram, ki omogoča identifikacijo spektra občutljivosti bakterij in izbiro optimalnega odmerka.

Če sumimo na tuberkulozo, se jutranji izpljunek pregleda tri dni. Pri testiranju na tuberkulozo bo rezultat pripravljen v 3-4 tednih, saj Mycobacterium tuberculosis, ki je povzročitelj bolezni, raste zelo počasi.

Običajno je treba odkriti predstavnike normalne mikroflore dihal. Upoštevati je treba tudi, da se lahko pri zmanjšani imunosti kazalniki normalne mikroflore razlikujejo.

Analiza sperme za občutljivost na antibiotike

Gre za bakteriološko preiskavo ejakulata sperme s poznejšo izbiro občutljivih antibiotikov in njihovih koncentracij. Najpogosteje se izvaja pri zdravljenju neplodnosti in drugih bolezni moškega reproduktivnega sistema. V primeru, da bolezen spremlja infekcijski proces. Glavni vzrok moške neplodnosti je v večini primerov okužba. Običajno se najprej opravi spermogram. Na podlagi rezultatov se ugotovi sposobnost oploditve sperme. Če v tej analizi najdemo veliko število levkocitov, lahko govorimo o vnetnem procesu. V tem primeru se običajno takoj predpiše mikrobiološka analiza, saj vnetje skoraj vedno spremlja okužba. Na podlagi pridobljenih rezultatov se izbere ustrezna terapija. Preiskavo običajno predpiše androlog.

Prostatitis in spolne bolezni so prav tako razlogi za izvedbo analize. Predpisana je tudi, če se pri partnerju odkrije spolna bolezen.

Osnova pravilne analize je najprej pravilen odvzem biološkega materiala. Material se odvzame v posebnih posodah s širokim vratom. Temperatura shranjevanja mora ustrezati temperaturi človeškega telesa. V tem primeru se material lahko shranjuje največ eno uro. V zamrznjeni obliki se lahko shranjuje največ en dan. Med jemanjem antibiotikov ni primerno odvzeti kulture, saj to spremeni klinično sliko. Običajno se kultura odvzame pred začetkom antibiotične terapije. Ali pa se zdravila prenehajo jemati 2-3 dni pred analizo.

Nato se poseje na hranilni medij. Inkubira se v termostatu 1-2 dni. Po tem se izolira čista kultura, nato se izvede identifikacija, določi se občutljivost ter vrsta in stopnja rasti vsake kolonije. Občutljivost na antibiotike se določi, če se odkrijejo patogeni mikroorganizmi. Analiza v povprečju traja 5-7 dni.

[ 39 ], [ 40 ], [ 41 ], [ 42 ], [ 43 ]

Test občutljivosti na gluten

Obstaja veliko testov, s katerimi se lahko določi imunološka občutljivost na različne snovi ali patogene. Prej je bila glavna metoda izvajanje testov, ki so temeljili na aglutinacijski reakciji protiteles in antigenov. Danes se ti testi uporabljajo vse manj, saj je njihova občutljivost precej nižja od mnogih sodobnih metod, kot so testi na gluten. Najpogosteje se v praksi zatečejo k testu sline na gluten in analizi blata.

Test občutljivosti na gluten se uporablja za diagnosticiranje različnih črevesnih motenj. Temelji na reakciji imunskega sistema. Če se blatu doda gluten, se reakcija pojavi ali pa je ni. To velja za lažno pozitiven ali lažno negativen rezultat. Pozitiven rezultat kaže na nagnjenost k kolitisu, veliko verjetnost njegovega razvoja. Potrjuje tudi celiakijo.

Možen je tudi test glutena z uporabo sline kot biološkega materiala. Možno je izmeriti količino protiteles proti gliadinu. Pozitiven rezultat kaže na občutljivost na gluten. To lahko kaže na veliko verjetnost sladkorne bolezni. Če sta oba testa pozitivna, se lahko potrdi sladkorna bolezen ali celiakija.

[ 44 ], [ 45 ]

Test občutljivosti na klamidijo na antibiotike

Analiza se izvaja pri zdravljenju infekcijskih in vnetnih bolezni urogenitalnega trakta, če obstaja sum na klamidijo. Material za študijo je strganje z vaginalne sluznice - pri ženskah, bris iz sečnice - pri moških. Odvzem se izvaja v prostorih za postopke z uporabo opreme za enkratno uporabo. Pomembno je ohraniti sterilnost. Pred odvzemom materiala se je treba 1-2 dni pred začetkom študije vzdržati intimnosti. Če ima ženska menstruacijo, se material odvzame 3 dni po njenem popolnem koncu.

Material se dostavi v laboratorij. Popolna analiza vključuje predhodno mikroskopijo razmaza. To omogoča vizualno določitev mikroflore po morfoloških značilnostih in pravilno izbiro hranilnih medijev. Vsebnost sluzi, gnoja in epitelijskih delcev lahko neposredno ali posredno kaže na razvoj vnetnega procesa ali maligne degeneracije celic.

Nato se izvede primarna setev. Kultura se več dni inkubira v termostatu in identifikacija se izvede na podlagi kulturnih značilnosti. Nato se kultura prenese v selektivna hranilna gojišča, namenjena gojenju klamidij. Nastale kolonije se identificirajo z uporabo biokemijskih testov. Nato se s standardnimi metodami določi občutljivost na antibiotike. Izbere se najobčutljivejši antibiotik in njegova koncentracija. Za gojenje klamidij so potrebna posebna gojišča, razvita posebej za to vrsto mikroorganizmov, ki vsebujejo vse potrebne snovi in rastne faktorje.

Študijo je mogoče izvesti tudi z biološko metodo. Za to se podgane okužijo s patogenom. V nekaterih laboratorijih se namesto podgan uporabi posebej vzgojena tkivna kultura. To je posledica dejstva, da so klamidije znotrajcelični paraziti in so za njihovo gojenje potrebni posebni pogoji. Nato se mikroorganizmi določijo z metodo PCR. Za določitev občutljivosti se presadijo na selektivni hranilni medij za klamidije in po nekaj dneh se zabeležijo rezultati. Odpornost ali občutljivost se presoja po zatiranju infekcijskega procesa v celicah.

[ 46 ], [ 47 ], [ 48 ], [ 49 ], [ 50 ], [ 51 ], [ 52 ], [ 53 ]

Koliko časa traja test občutljivosti na antibiotike?

V povprečju je analiza opravljena v 5-7 dneh. Nekatere analize trajajo dlje. Na primer, pri diagnosticiranju tuberkuloze je treba na rezultate čakati od 3 tednov do enega meseca. Vse je odvisno od stopnje rasti mikroorganizmov. Pogosto se mora laboratorijsko osebje soočiti s primeri, ko pacienti prosijo za hitrejšo analizo. In celo ponudijo "doplačilo" za nujnost. Vendar pa morate tukaj razumeti, da v tem primeru ni nič odvisno od dejanj laboratorijskega asistenta. Odvisno je le od tega, kako hitro mikroorganizem raste. Vsaka vrsta ima svojo, strogo določeno stopnjo rasti.

Normalna učinkovitost

Za vse analize ni absolutnih univerzalnih normativnih vrednosti. Prvič, te vrednosti se lahko razlikujejo za vsak biotop. Drugič, so individualne za vsak mikroorganizem. To pomeni, da so normativne vrednosti za isti mikroorganizem, recimo za grlo in črevesje, različne. Torej, če v grlu prevladuje stafilokok kot predstavnik normalne mikroflore, potem v črevesju prevladujejo E. coli, bifido- in laktobakterije. Vrednosti za isti mikroorganizem v različnih biotopih se lahko prav tako bistveno razlikujejo. Na primer, Candida je lahko običajno prisotna v določeni količini v urogenitalni mikroflori. Običajno ni prisotna v ustni votlini. Prisotnost Candide v ustni votlini lahko kaže na njihov umetni vnos iz njihovega naravnega habitata.

Urin, kri, cerebrospinalna tekočina so biološka okolja, ki bi morala biti običajno sterilna, torej ne bi smela vsebovati nobene mikroflore. Prisotnost mikroflore v teh tekočinah kaže na močan vnetni, infekcijski proces, poleg tega pa kaže na tveganje za razvoj bakteriemije in sepse.

Na splošno obstaja približna klasifikacija. Merska enota v mikrobiologiji je CFU/ml, to je število enot, ki tvorijo kolonije, v 1 mililitru biološke tekočine. Stopnja kontaminacije je določena s številom CFU in se giblje v širokem razponu od 101 ^do 109. ^V skladu s tem je ¹⁰¹ minimalno število mikroorganizmov, 109 ^pa huda stopnja okužbe. Hkrati se razpon do 103 ^šteje za normalen, vsi kazalniki nad tem številom pa kažejo na patološko razmnoževanje bakterij.

Kar zadeva občutljivost na antibiotike, so vsi mikroorganizmi razdeljeni na odporne, zmerno občutljive in občutljive. Ta rezultat se pogosto izraža kot kvalitativna značilnost, ki označuje MID - minimalni zaviralni odmerek antibiotika, ki še vedno zavira rast mikroorganizma. Za vsako osebo, pa tudi za vsak mikroorganizem, so ti kazalniki strogo individualni.

[ 54 ], [ 55 ], [ 56 ], [ 57 ]

Naprava za analizo

Pri izvajanju bakterioloških raziskav, zlasti pri določanju občutljivosti na antibiotike, ena naprava ne bo dovolj. Potrebna je popolna, celovita oprema bakteriološkega laboratorija. Skrbno je treba načrtovati in izbrati opremo, ki bo ustrezala vsaki fazi raziskave. V fazi zbiranja biološkega materiala so potrebni sterilni instrumenti, škatle, posode, skladiščne komore in transportna oprema za dostavo materiala v laboratorij.

V laboratoriju boste najprej potrebovali visokokakovosten mikroskop za mikroskopijo razmaza. Danes obstaja veliko število mikroskopov z različnimi lastnostmi - od tradicionalnih svetlobnih do fazno-kontrastnih in atomskih silovnih mikroskopov. Sodobna oprema omogoča skeniranje slike v tridimenzionalnem prostoru in njen pregled pri veliki povečavi z visoko natančnostjo.

V fazi sejanja in inkubacije mikroorganizmov so lahko potrebni avtoklavi, suhogrelne omare, eksikatorji, parne kopeli in centrifuga. Potreben je termostat, v katerem poteka glavna inkubacija biološkega materiala.

V fazi identifikacije mikroorganizmov in izvajanja antibiograma so lahko potrebni mikromanipulatorji, masni spektrometri, spektrofotometri, kolorimetri za različne izračune in oceno biokemijskih lastnosti kultur.

Poleg tega so sodobni laboratoriji lahko opremljeni z visokotehnološko opremo, ki izvaja vse zgoraj omenjene glavne faze raziskav, vse do izračuna rezultatov v avtomatskem načinu. Med takšne naprave spada na primer kompleksna naprava bakteriološkega laboratorija, ki temelji na masnem spektrometru s časom preleta. Ta linija naprav omogoča razdelitev celotnega ozemlja laboratorija na tri cone. Prva cona je umazana, kjer se sprejemajo in registrirajo testi. Druga cona je delovna cona, kjer se dejansko izvajajo glavne mikrobiološke raziskave. Tretja cona pa je sterilizacija in avtoklaviranje, kjer se izvaja priprava in odstranjevanje delovnega materiala.

Modeli omogočajo inkubacijo pri širokem razponu temperatur in pogojev. Vsebuje vgrajen analizator krvi in drugih bioloških vzorcev, ki daje rezultate z visoko natančnostjo in zanesljivostjo. Komplet vključuje elektronske tehtnice, bidestilatorje, centrifuge, avtoklave in sterilizacijske omare, avtomatski kuhalnik medija, vodno kopel z vgrajenim mešalom, pH metre, termometre in mikroskope.

Uporablja se tudi mikrobiološki analizator, v katerega se dajo vzorci za testiranje, hranilni mediji in kompleti testov za določanje občutljivosti. Naprava izvede potrebne študije in izda že pripravljen zaključek.

Dvigovanje in zniževanje vrednosti

Analizo lahko dešifrira le zdravnik. Toda pogosto pacienti po prejemu rezultatov zgrabijo paniko, saj opazijo veliko število nerazumljivih simbolov in številk. Da se ne bi izgubili, je priporočljivo imeti vsaj splošno predstavo o tem, kako dešifrirati analizo občutljivosti na antibiotike. Običajno prva postavka v rezultatih označuje ime mikroorganizma, ki je povzročitelj bolezni. Ime je navedeno v latinščini. Lahko označuje tudi predstavnika normalne mikroflore, ki prevladuje v telesu, zato ni treba paničariti. Druga postavka označuje stopnjo zasejanosti, torej število mikroorganizmov. Običajno se to število giblje od 101 ^do 109. ^Tretja postavka označuje obliko patogenosti, četrta pa imena antibakterijskih zdravil, na katera je ta mikroorganizem občutljiv. V bližini je navedena minimalna inhibitorna koncentracija, pri kateri je rast mikroorganizma zavirana.

[ 58 ], [ 59 ], [ 60 ], [ 61 ], [ 62 ], [ 63 ]