Medicinski strokovnjak članka
Nove publikacije
Analiza polimorfizma dolžine omejevalnih fragmentov
Zadnji pregled: 23.04.2024
Vsa vsebina iLive je pregledana ali preverjena, da se zagotovi čim večja dejanska natančnost.
Imamo stroge smernice za pridobivanje virov in samo povezave do uglednih medijskih strani, akademskih raziskovalnih institucij in, kadar je to mogoče, medicinsko pregledanih študij. Upoštevajte, da so številke v oklepajih ([1], [2] itd.) Povezave, ki jih je mogoče klikniti na te študije.
Če menite, da je katera koli naša vsebina netočna, zastarela ali drugače vprašljiva, jo izberite in pritisnite Ctrl + Enter.
Široka uporaba različnih omejevalnih endonukleaz za analizo kromosomske DNA je pokazala veliko spremenljivost v človeškem genomu. Celo majhne spremembe kodirnih in regulativnih regij strukturnih genov lahko vodijo do prenehanja sinteze določenega proteina ali izgube njegove funkcije v človeškem telesu, kar običajno vpliva na fenotip pacienta. Vendar pa približno 90% človeškega genoma sestoji iz nekodirajočih zaporedij, ki so bolj spremenljive in vsebujejo številne tako imenovane nevtralne mutacije ali polimorfizme in nimajo fenotipskega izraza. Taka polimorfna mesta (loki) se uporabljajo pri diagnostiki dednih bolezni kot genetskih markerjev. Polimorfni loki so prisotni v vseh kromosomih in so povezani s specifično regijo gena. Po določitvi lokalizacije polimorfnega lokusa je mogoče ugotoviti, s katerim genom je povezana mutacija, ki je povzročila bolezen pri bolniku.
Za izolacijo polimorfnih regij DNK se uporabljajo bakterijski encimi - omejevalni encimi, katerih produkt so omejevalna mesta. Spontane mutacije, ki se pojavljajo na polimorfnih mestih, so odporne ali nasprotno občutljive na delovanje določenega omejevalnega encima.
Mutacijsko spremenljivost v restrikcijskih mestih je mogoče zaznati s spreminjanjem dolžine omejenih fragmentov DNA, tako da jih ločimo z elektroforezo in naknadno hibridizacijo s specifičnimi DNA sondami. V odsotnosti omejitve na polimorfnem mestu se na elektroforegramih odkrije en velik fragment in če je prisoten, bo prisoten manjši fragment. Prisotnost ali odsotnost restrikcijskega mesta v identičnem loku homolognih kromosomov omogoča zanesljivo označevanje mutiranega in normalnega gena ter sledenje njegovemu prenosu na potomce. Tako je pri študiji DNA pacientov v obeh kromosomih, kjer je v polimorfni regiji prisotno mesto restrikcije, na elektroforegramu odkrili kratke fragmente DNA. Pri bolnikih, ki so homozigotni za mutacijo, ki spreminja polimorfno mesto restrikcije, bodo zaznani fragmenti večje dolžine, pri heterozigotnih fragmentih pa bodo identificirani kratki in dolgi fragmenti.
[