Medicinski strokovnjak članka
Nove publikacije
Analiza polimorfizma dolžine restrikcijskih fragmentov
Zadnji pregled: 05.07.2025
Vsa vsebina iLive je pregledana ali preverjena, da se zagotovi čim večja dejanska natančnost.
Imamo stroge smernice za pridobivanje virov in samo povezave do uglednih medijskih strani, akademskih raziskovalnih institucij in, kadar je to mogoče, medicinsko pregledanih študij. Upoštevajte, da so številke v oklepajih ([1], [2] itd.) Povezave, ki jih je mogoče klikniti na te študije.
Če menite, da je katera koli naša vsebina netočna, zastarela ali drugače vprašljiva, jo izberite in pritisnite Ctrl + Enter.
Široka uporaba različnih restrikcijskih endonukleaz za analizo kromosomske DNK je razkrila ogromno variabilnost človeškega genoma. Že majhne spremembe v kodirajočih in regulatornih regijah strukturnih genov lahko privedejo do prenehanja sinteze določene beljakovine ali do izgube njene funkcije v človeškem telesu, kar običajno vpliva na bolnikov fenotip. Vendar pa približno 90 % človeškega genoma sestavljajo nekodirajoča zaporedja, ki so bolj variabilna in vsebujejo veliko tako imenovanih nevtralnih mutacij oziroma polimorfizmov ter nimajo fenotipske ekspresije. Takšne polimorfne regije (lokusi) se uporabljajo pri diagnozi dednih bolezni kot genetski označevalci. Polimorfni lokusi so prisotni v vseh kromosomih in so povezani s specifično regijo gena. Z določitvijo lokalizacije polimorfnega lokusa je mogoče ugotoviti, kateri gen je povezan z mutacijo, ki je povzročila bolezen pri bolniku.
Za izolacijo polimorfnih regij DNK se uporabljajo bakterijski encimi - restriktaze, katerih produkt so restrikcijska mesta. Spontane mutacije, ki se pojavijo na polimorfnih mestih, jih naredijo odporne ali, nasprotno, občutljive na delovanje specifične restriktaze.
Mutacijsko variabilnost na restrikcijskih mestih lahko zaznamo s spreminjanjem dolžine restrikcijskih fragmentov DNK z ločevanjem z elektroforezo in naknadno hibridizacijo s specifičnimi DNK sondami. Če na polimorfnem mestu ni restrikcijskega mesta, bo na elektroforegramih zaznan en velik fragment, v njegovi prisotnosti pa manjši fragment. Prisotnost ali odsotnost restrikcijskega mesta v identičnih lokusih homolognih kromosomov omogoča dokaj zanesljivo označevanje mutantnega in normalnega gena ter sledenje njegovemu prenosu na potomce. Tako bodo pri preučevanju DNK bolnikov, v obeh kromosomih katerih je restrikcijsko mesto prisotno v polimorfni regiji, na elektroforegramu zaznani kratki fragmenti DNK. Pri bolnikih, homozigotnih za mutacijo, ki spremeni polimorfno restrikcijsko mesto, bodo zaznani daljši fragmenti, pri heterozigotnih bolnikih pa kratki in dolgi fragmenti.
[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]