Konfokalna mikroskopija

Konfokalna mikroskopija trenutno velja za eno najbolj obetavnih metod za slikanje kože in vivo, zato je zanimanje zanjo nenavadno veliko tako med zdravniki kot predstavniki raziskovalnih inštitutov.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]

Zmogljivosti konfokalne mikroskopije

V dermatologiji se konfokalna laserska mikroskopija uporablja za:

• preučevanje prodiranja spojin v kožo (poti prodiranja, kinetika, porazdelitev v koži);
• opazovanje delovanja žlez (določitev aktivnega in pasivnega stanja);
• študije mikrocirkulacijskega dna (vključno s študijami v realnem času);
• diagnostika novotvorb.

Brez razprave o prednostih in slabostih zgoraj omenjenih vrst konfokalne mikroskopije ugotavljamo, da je v zadnjih letih fluorescenčna laserska konfokalna mikroskopija postala vse bolj priljubljena.

[ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Konfokalna mikroskopija za pregled kože

Konfokalni mikroskop ponuja dve neprecenljivi možnosti - preučevanje tkiv na celični ravni v stanju fiziološke vitalne aktivnosti in prikaz rezultatov študije (tj. celične aktivnosti) v štirih dimenzijah - višini, širini, globini in času. Za kakovost slike in globino študije ima najpomembnejšo vlogo sposobnost tkiva, da prepušča svetlobo, z drugimi besedami, njegova prosojnost. Metoda konfokalne mikroskopije je brezstična, svetlobni žarek ne povzroča nobene škode ali nelagodja pregledanemu pacientu ali poskusni živali.

Za pregled kože se uporablja konfokalna vrstična laserska mikroskopija (CSLM). Metoda omogoča ogled povrhnjice in papilarne plasti dermisa z ločljivostjo, ki je blizu histološki. Vsi rezultati pregleda so prikazani na monitorju in shranjeni kot paket slikovnih datotek (kot mikrofilm (v dinamiki) ali mikrofotografije).

Obstajata dve vrsti metode:

• reflektivna (odbojnost CSLM) - temelji na dejstvu, da imajo različne znotrajcelične in medcelične strukture različne lomne količnike svetlobe, kar omogoča pridobitev kontrastne slike.
• fluorescenca (fluorescenca CSLM) - uporablja lasersko svetlobo, ki prodre skozi kožo in v njej vzbudi ekso- ali endokromofore, ki v odgovor začnejo oddajati fotone (tj. fluorescirati).

Lateralna ločljivost je najmanjša razdalja med točkami, ki se nahajajo na vodoravni ravnini, tj. ravnini, vzporedni s površino kože. Aksialna ločljivost je najmanjša razdalja med točkami, ki se nahajajo na ravnini, pravokotni na površino kože.

[ 8 ], [ 9 ], [ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ]

Zgodovina konfokalne mikroskopije

Zamisel o ustvarjanju mikroskopa, ki bi lahko prikazal prerez živega tkiva na celični ravni, se je aktivno razvijala pred 130 leti. Glavni element sodobnih mikroskopov je bil zasnovan konec 19. stoletja in je bil vrtljiv disk z drobnimi luknjicami, razporejenimi v spiralo. Ta disk je leta 1883 izumil nemški študent Paul Nipkow, po katerem je bil tudi poimenovan - Nipkowov disk (ali Nipkow disk). Izum je temeljil na sposobnosti svetlobe, ki prehaja skozi drobne luknjice v disku in povečevalno lečo, da prodre globoko v tkivo in osvetli celični delček na določeni razdalji od površine. Ko se disk hitro vrti, delci tvorijo eno samo sliko. Z odmikanjem strukture od predmeta ali bližje njemu je mogoče spreminjati globino optičnega prereza preučevanega tkiva.

Šele s pojavom videorekorderjev v osemdesetih letih prejšnjega stoletja in računalnikov, ki so lahko obdelovali slike, v zgodnjih devetdesetih letih prejšnjega stoletja je postalo mogoče ustvariti in učinkovito uporabljati sodobne mikroskope, ki se uporabljajo danes.