Medicinski strokovnjak članka
Nove publikacije
PCR kot metoda diagnosticiranja genetskih bolezni
Zadnji pregled: 04.07.2025
Vsa vsebina iLive je pregledana ali preverjena, da se zagotovi čim večja dejanska natančnost.
Imamo stroge smernice za pridobivanje virov in samo povezave do uglednih medijskih strani, akademskih raziskovalnih institucij in, kadar je to mogoče, medicinsko pregledanih študij. Upoštevajte, da so številke v oklepajih ([1], [2] itd.) Povezave, ki jih je mogoče klikniti na te študije.
Če menite, da je katera koli naša vsebina netočna, zastarela ali drugače vprašljiva, jo izberite in pritisnite Ctrl + Enter.
PCR je nov dosežek molekularne genetike, ki se uporablja za amplifikacijo DNK in omogoča hitro in vitro razmnoževanje specifične regije DNK (tj. katerega koli gena, ki nas zanima) več kot 200.000-krat. Za izvedbo reakcije je dovolj imeti DNK material iz ene celice; količina DNK, amplificirane s PCR, je tako velika, da lahko to DNK preprosto obarvamo (uporaba radioaktivnih sond po elektroforezi ni potrebna). Predpogoj za izvedbo PCR je poznavanje nukleotidnega zaporedja amplificirane regije DNK za pravilno izbiro umetno sintetiziranih začetnih oligonukleotidov.
Trenutno je PCR postopek v eni epruveti, ki ga sestavljajo ponavljajoči se cikli amplifikacije (reprodukcije, kopiranja) specifičnega zaporedja molekule DNK, da se dobi dovolj veliko število kopij, ki jih je mogoče identificirati z elektroforezo. Ena ključnih komponent reakcije so "primeri" - sintetični oligonukleotidi, sestavljeni iz 20-30 baz, ki so komplementarne "mestim" (območjem) žarjenja (pritrditve) na identificiranem območju matrične DNK.
PCR poteka samodejno v programabilnem termostatu - termociklerju (ojačevalniku). Tristopenjski cikel, ki povzroči natančne kopije identificiranega odseka matrične DNK, se ponovi 30-50-krat v skladu z določenim programom termociklerja. V prvem ciklu se oligoprimeri hibridizirajo z originalno matrično DNK, nato pa (v naslednjih ciklih) z novo sintetiziranimi molekulami DNK, ko se kopičijo v reakcijski zmesi. V slednjem primeru se sinteza DNK ne konča zaradi spremembe temperature, temveč ob dosegu meje DNK polimeraze amplificiranega odseka, ki določa velikost novo sintetiziranega odseka DNK z natančnostjo enega nukleotida.
Elektroforeza se uporablja kot metoda za detekcijo pridobljenih molekul DNK, s pomočjo katere se amplificirani material loči glede na velikost amplikonov (produktov amplifikacije).
PCR se lahko uporabi za neposredno preučevanje lokacij domnevnih mutacij ali polimorfnih mest, pa tudi za preučevanje prisotnosti drugih specifičnih značilnosti DNK.
[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]