Hematopoetične izvorne celice

Hemopoetične matične celice (HSCs) kot mezenhimskih matičnih celic značilna multipotentnost in povzročajo celične linije, končnih elementov, ki tvorijo krvne celice in nekaj specializiranih tkivne celice imunskega sistema.

Hipoteza o obstoju skupnega prednika vseh krvnih celic, kot tudi izraz "matičnih celic", v lasti A. Maximova (1909) Potencial tvorbe celične mase iz GSK velik -. Bone matičnih mozga celice proizvajajo 10. Dan celice, ki tvorijo krvna telesca samega perifernih. Obstoj hematopoetskih matičnih celic je bilo ustanovljeno leta 1961 v poskusih na izterjavi hematopoeze pri miših, ki so prejemali smrtnega odmerka izpostavljenosti sevanju, ki uničuje celic kostnega mozga. Pos tj presaditev celic singenskih kostnega mozga, tako na smrt obsevanih živali diskretna žarišča hematopoeze so bile odkrite v vranici prejemnikov, katerih vir - enojni klonogene matičnih celic.

Nato je bila dokazana zmožnost hematopoetskih matičnih celic do samopodobe, ki zagotavlja funkcijo hematopoeze med ontogenezo. V procesu razvoja zarodka so HSC značilne visoke migracijske aktivnosti, ki so potrebne za njihov prehod na mesta hematopoetskih organov. Ta lastnost HSC se ohranja tudi v ontogenezi - zaradi nenehne migracije poteka stalna prenova celice imunokompetentnih celic. Sposobnost GSK migracije, penetracijo skozi pregrad v krvi tkiva, implantacija rasti tkiva in klonogene zagotovil podlago za presaditev celic kostnega mozga v številnih bolezni, povezanih z motnjami v hemopoietic sistema.

Kot vsi viri matičnih celic, hematopoetske matične celice so prisotne v vašem nišo (kostnega mozga) v zelo majhnih količinah, ki vodi na nekatere težave pri njihovem dodeljevanju. Immunophenotypic človeških HSCs so označene kot CD34 + celice NK sposobne prehaja v krvni obtok in kolonizira organe imunskega sistema ali repopulate strome kostnega mozga. To je treba jasno razumeti, da je GSK ni celice najbolj nezrele kostnega mozga, in so pridobljeni iz predhodnimi sestavinami, ki vključujejo dormantnye fibroblastom SB34-negativnih celic. Ugotovljeno je bilo, da so celice z fenotip CD34 lahko vstopijo v krvni obtok, kjer spremeniti svojo fenotip v CD34 +, vendar je migracija vrnitev v kostnem mozgu pod vplivom mikrookolja spet postala CD34-negativna izvornih celic elementi. V mirovanju CD34 celice ne reagirajo na parakrine regulativne stromalne signale (faktorji rasti, citokini). Vendar pa je v primerih, ki zahtevajo intenzivnosti ojačanje hemopoetičnih matičnih celic z fenotipa CD34 odzove na diferenciacija signali tvori tako hematopoetično in mezenhimskih matičnih celic. Hematopoeze izvedemo z neposrednim stikom z celičnih elementov GSK iz strome kostnega mozga predstavljeni kompleksno mrežo makrofagov, reticular endotelijskih celic, osteoblastov, stromalnih fibroblasti in ekstracelularnega matriksa. Kostnega mozga stromalni okvir - ne le matriks ali "ogrodje" za krvotvorne tkiva, ki jih opravlja fino uravnavanje hematopoeze zaradi parakrin regulatorne signale rastnih faktorjev, citokinov in Kemokini ter tako zagotavlja lepilne interakcije, potrebne za tvorbo krvnih celic.

Tako je osnova nenehno posodobljenega sistema hemopoeze hemopoetska matična celica, ki je sposobna podaljšanega samonadzora. Med procesom zavezovanja HSCs temeljijo na primarni diferenciaciji in tvorijo klone celic, ki se razlikujejo po njihovih citomorfoloških in imunofenotipskih značilnostih. Zaporedno oblikovanje primitivnih in zavezujočih progenitornih celic se zaključi z oblikovanjem morfološko prepoznavnih predhodnih celic različnih hematopoetskih linij. Rezultat zaporednimi stopnjami kompleksnega večstopenjskem procesu je zorenje hematopoetičnih celic in dobitkom zrelih za oblikovanih elementov periferne krvi - eritrocitov, levkocitov, limfocitov in trombocitov.

[1], [2], [3],

Viri hematopoetskih izvornih celic

Hematopoetske matične celice se štejejo za najbolj raziskana vir izvornih, ki je v veliki meri posledica njihove uporabe v kliniki za presaditev kostnega mozga. Na prvi pogled je veliko teh znanih celic. Do neke mere je to res, saj vmesnih in zrele potomci GSK - najbolj ugodne celične elemente, od katerih je vsak (eritrociti, levkociti, limfociti, monociti / makrofagi in trombociti) temeljito študiral na vseh ravneh - od svetlobe, da elektronska mikroskopija, od biokemične in imunofenotipske lastnosti pred identifikacijo s PCR analizo. Vendar pa nadzor izvaja morfološke, ultrastrukturni, biokemijske, immunophenotypic in biofizikalnih parametrov genomske GSK ni dala odgovorov na mnogih problematičnih vprašanj, rešitev, ki je potrebna za razvoj presaditev celic. Še vedno ni vzpostavila mehanizme za stabilizacijo GSK v mirujočem stanju, so aktivirane, stopita na oder za simetrično ali asimetrično delitev, in kar je najpomembnejše - zaveze do izobraževanja kot funkcionalno različnih krvnih celic, eritrocitov, levkocitov, limfocitov in trombocitov.

Prisotnost v celicah kostnega mozga z fenotip CD34, ki so predniki tako mezenhimskih in hematopoetskih matičnih celic je postavljeno vprašanje obstoja prvi bližini CD34-negativne celice v diferenciacije v matičnih celic in hematopoetskih stromalnega linijo. Z metodo dolgotrajne kulture dobimo tako imenovano dolgoročno celico, ki sproži kulturo (LTC-IC). Življenjska doba teh predniških celic v formirajo kolonijo aktivnostjo stromalnega kostnega mozga, na osnovi kombinacije rastnih faktorjev je več kot 5 tednov, ker preživetja predanih enot, ki tvorijo kolonije (CFU) v kulturi samo 3 tednih. Trenutno je Menimo, da LTC-IC - funkcionalni analog GCW kot so repopulyatsionnom pri visoki potencial okoli 20% LTC-IC označen s fenotipom CD34 + CD38- in imajo veliko kapaciteto za samoobnovitve. Najdemo v človeškem kostnem mozgu s frekvenco 1:50 000. Vendar take celice, je treba priznati, limfoidoinitsiiruyuschie-mieloično celice najbližje za varovanje zdravja, ki so pridobljeni v skladu s pogoji, dolgotrajno (15 tednov) kulture. Takšne celice so označeni kot LTC med kostnega mozga človeka so našli v 10-krat manjša od LTC-IC, in je tvorjen kot mieloidnih celičnih linij in limfnega hemopoietic stebla.

Čeprav hematopoetske matične celice označevanje z monoklonskimi protitelesi, ki ji sledi identifikacija immunophenotypic je glavni Postopek za identifikacijo in selektivno razvrščanje hematopoetskih izvornih celic s potencialno klinično uporabo namenske GSK tako omejeno. Blokiranje protitelesa CD34 receptor ali drugih antigenov označevalne med sortiranjem immunopositive neizogibno spreminja lastnosti celic, izoliranih z njo. Bolj prednostno je imuno-negativna sekrecija HSC na magnetnih stebrih. Vendar pa se v tem primeru praviloma za razvrščanje uporabljajo monoklonska protitelesa, pritrjena na kovinski nosilec. Poleg tega je pomembno, da obe metodi izolacije HSC temeljita na fenotipskih in ne na funkcionalnih značilnostih. Zato mnogi raziskovalci raje uporabljajo analizo klonogene parametrov GSK, ki omogoča, da velikost in sestavo kolonij, da določi stopnjo zrelosti in smer diferenciacije matičnih celic. Znano je, da se v procesu določanja števila celic in števila njihovih vrst v koloniji zmanjša. Krvotvornih matičnih celic in njena hči celic zgodaj, se imenuje "granulocitne-eritrocitov monocitov-megakariotsitokolonieobrazuyuschaya enota" (SFU-GEMM), ustvarjajo velike kolonije kulture multilinear vsebujejo, oziroma, granulociti, eritrocitov, monocitov in megakariocitov. Ki se nahaja pod linijo granulocitne rod obveza monotsitokolonieobrazuyuschaya enoto (SFU-GM) ustvarja kolonije granulocitov in makrofagov ter granulocitnih kolonij, ki tvorijo enote (SFU-g) - le majhne kolonije zrelih granulocitov. Zgodnje eritrocitov predhodnik - burstoobrazuyuschaya enota rdečih krvnih celic (SFU-E) - je vir velikih in bolj zrele rdečih krvnih celic, ki tvorijo kolonije enoto (SFU-E) - majhne rdeče kolonije krvnih celic. V splošni populaciji, pri rasti celic v poltrdnih medijih lahko identificiramo celice, ki tvorijo šest vrst mieloidnih kolonij: SFU-GEMM, GM-SFU, SFU-G, M-SFU, VFU-E in E-SFU).

Vendar pa poleg hematopoetskih derivatov katerikoli izvorni material za izolacijo HSC vsebuje veliko število sočasnih celic. V zvezi s tem je potrebno predhodno čiščenje presadka, najprej aktivnih celic imunskega sistema darovalca. Običajno se za to uporablja imunosupcija, ki temelji na ekspresiji limfocitov specifičnih antigenov, kar omogoča izolacijo in odstranitev z uporabo monoklonskih protiteles. Poleg tega tehniko immunorozetochnaya T-limfocitov osiromašenega presaditev kostnega mozga, ki temelji na tvorbi kompleksov CD4 + limfocite in specifičnih monoklonskih protiteles učinkovito odstranimo z uporabo afereze. Ta tehnika zagotavlja očiščen celični material s 40-60% hematopoetskih matičnih celic.

Povečanje števila matičnih celic zaradi odstranitve zrelih krvnih celic iz proizvoda levkafereze dosežemo s protitočno centrifugiranjem ter nato filtriramo (v prisotnosti kelatorjem - trinatrijevega citrata) skozi kolono, ki vsebuje najlon vlakna obložimo z humani imunoglobulin. Usklajena uporaba teh dveh tehnik zagotavlja popolno čiščenje presadka iz trombocitov, 89% od eritrocitov in 91% belih krvnih celic. Zaradi znatnega zmanjšanja izgub HSC se lahko raven celic CD34 + v celotni celični masi poveča na 50%.

Za funkcionalne značilnosti izoliranih hematopoetskih matičnih celic se uporablja njihova sposobnost ustvarjanja kolonij zrelih krvnih elementov v kulturi. Analiza nastalih kolonij omogoča identifikacijo in količinsko opredelitev vrst progenitornih celic, stopnjo njihovega izvajanja in določitev smeri njihovega razlikovanja. Klonogeno aktivnost določimo v poltrdih medijih na metilcelulozo, agarju, plazmi ali fibrinskem gelu, kar zmanjšuje migracijsko aktivnost celic, kar preprečuje njihovo pritrditev na površino stekla ali plastike. V optimalnih razmerah kulture se kloni iz ene celice razvijejo v 7-18 dneh. Če je v klonu manj kot 50 celic, se identificira kot enosmerni grozd, če število celic presega 50 - kot kolonija. Upošteva se število celic, ki lahko tvorijo kolonijo (enote za oblikovanje kolonije - CFU ali celice, ki tvorijo kolonije - COC). Treba je opozoriti, da so parametri in CFU COC ne ustreza številu HSC v celični suspenziji, čeprav je v korelaciji s tem ponovno poudarja, da je treba za določitev aktivnosti funkcionalno (tvorbe kolonij) za HSCs vitro.

Med celicami kostnega mozga imajo hematopoetske matične celice največji proliferativni potencial, zaradi česar so v kulturi največje kolonije. Po številu takšnih kolonij je predlagano posredno določiti število izvornih celic. Po tvorbi kolonij in vitro nad 0.5 mm in s številom celic 1000, so avtorji testirali stabilnost teh celic za subletalne doze 5-fluorouracil in pregledati njihovo zmožnost repopulate kostni mozeg na smrt obsevanih živali. Glede na te parametre se izolirane celice niso zelo razlikovale od HSC in prejele kratico simbol HPP-CFC - kolonije, ki tvorijo kolonije z visokim proliferativnim potencialom.

Iskanje možnosti za bolj kvalitativno izbiro hematopoetskih matičnih celic se nadaljuje. Vendar pa hematopoetske matične celice morfološko podobni limfocitov in razmeroma enotno zbirko celic s skoraj okroglo jeder, kromatina in slabobazofilnoy delcev majhni količini citoplazmo. Točno število je težko določiti. Predpostavlja se, da se GSK v kostnem mozgu osebe pojavi s frekvenco 1 na 106 celic, ki vsebujejo jedro.

Identifikacija hematopoetskih izvornih celic

Za izboljšanje identifikacijo hematopoetskih izvornih celic izvedemo zaporedno ali istočasno (na večkanalno sorbitanom tere) raziskovalne membrannosvyazannyh spektrom antigenov, pri čemer je treba GSK fenotip CD34 + CD38 kombinaciji s pomanjkanjem diferenciacije označevalcev ravnega, zlasti antigeni imunokompetentnih celic kot CD4 in površinske imunoglobulini glikophorin.

Skoraj vse vezje fenotipizacijo hematopoetskih izvornih celic vključuje določitev CD34 antigen. Ta glikoprotein z molekulsko maso okoli 110 kDa, ki predstavljajo več glikozilacijskih mest, izraženo na plazemski membrani celic po aktiviranju gena lokalizirana na kromosomu 1. Funkcija molekule CD34 je povezana z L-selektinom posredovano interakcijo zgodnjih hematopoetskih prekurzorskih celic s stromalno bazo kostnega mozga. Vendar pa je treba upoštevati, da je prisotnost CD34 antigen na površini celic omogoča le, da predhodno oceno vsebine GSK v celični suspenziji, ki je izražena in drugi hemopoetičnih predhodnih celic in kostnega mozga stromalnih celic in endotelnih celic.

Med diferenciacijo hematopoetskih progenitornih celic je ekspresija CD34 trajno zmanjšana. Eritrocitne, granulocitne in monocitne prednameščene progenitorne celice bodisi šibko izražajo antigen CD34 ali pa sploh niso prisotne na njihovi površini (fenotip CD34). Na površinski membrani diferenciranih celic kostnega mozga in zrelih krvnih celic ni odkritega antigena CD34.

Omeniti je treba, da ne le v dinamiki razlikovanje hematopoietičnih matičnih celic zmanjša nivo ekspresije CD34, vendar vzporedno postopoma povečano ekspresijo CD38 antigen - sestavni membranski glikoprotein z molekulsko maso 46 kDa, ki ima NAD-glikogidrolaznoy in ciklazno aktivnost ADP-ribozil, kar kaže na svojo prisotnost pri transportu in sintezi ADP-riboze. Tako obstaja možnost dvojnega nadzora nad stopnjo zavezovanja hematopoetskih prednikov. Populacija celic s fenotipom CD34 + CD38 +, iz celic kostnega mozga CD34 pozitivnih 90-99% obsega predhodnih celic z omejeno proliferativne potencialne in diferenciacije, ker s fenotipom lahko CD34 + CD38 celice zahtevku vlogo GSK.

Dejansko je populacija celic kostnega mozga, s formulo CD34 + CD38- opisano, vsebuje relativno veliko število primitivnih matičnih celic, ki lahko diferencirajo v mieloidnih in limfnih linij. V okviru dolgoročnega gojenje fenotip CD34 + CD38- celic uspelo priti vse zrele krvne celice: nevtrofilcev, eozinofilcev, bazofilcev, monocitov, megakariocitov, eritrocitov in limfocite.

Pred kratkim ugotovili, da CD34 pozitivnih celic izražajo še dva označevalca - AC133 in CD90 (Thy-1), ki se uporablja tudi za identifikacijo hemopoetičnih matičnih celic. Thy-1 antigen sočasno izražena z receptorjem CD117 (c-kit) na CD34 + celic kostnega mozga, celic popkovnične in periferni krvi. Gre za površinski fosfatidilinositol, ki veže glikoprotein z molekulsko maso 25-35 kDa, ki sodeluje v postopkih celične adhezije. Nekateri avtorji verjamejo, da je antigen Thy-1 označevalec najbolj nezrelih CD34-pozitivnih celic. Samodejno razmnoževalne celice s fenotipom CD34 + Thy-1 + povzročajo dolgožive linije s tvorbo hčerinskih celic. Predlaga se, da antigen Thy-1 blokira regulacijske signale, ki povzročijo, da se delitev celic ustavi. Kljub temu, da so CD34 + TU1 + celice sposobne samoobnovitve in ustvarjanje dolgoročnih kultiviranih linij, njihov fenotip ne more nanašati le na varovanje zdravja, kot je Thy-1 + vsebina v skupni teži CD34 pozitivnih celic elementov okoli 50%, če prekoračitev število hematopoetskih celic.

Bolj obetaven za identifikacijo hematopoetskih matičnih celic je AC133, antigen marker hematopoetskih progenitornih celic, katerih izražanje je bilo najprej ugotovljeno na embrionalnih jetrnih celicah. AC133 je transmembranski glikoprotein, ki se pojavlja na površini celične membrane v najzgodnejših fazah zorenja GSK - možno je, da je celo prej kot antigen CD34. V študijah A. Petrenka in V. Grishchenka (2003) je bilo ugotovljeno, da AC133 izraža do 30% CD34-pozitivnih celic embrionalne jeter.

Tako je izhodišče fenotipsko profil hematopoetskih izvornih celic, ki jih danes koncepti, vsota celic obris, v vezjih, ki mora biti prisoten CD34 antigeni konfiguracijo, AC133 in Thy-1, vendar ni prostora za projekcije CD38 molekulsko, HLA-DR in označevalci linearni diferenciacija GPA , CD3, CD4, CD8, CD10, CD14, CD16, CD19, CD20.

Sprememba fenotipskega portreta HSC je lahko kombinacija CD34 + CD45RalowCD71low, ker se lastnosti celic, opisane s to formulo, ne razlikujejo od funkcionalnih parametrov celic s fenotipom CD34 + CD38. Poleg tega lahko humani GSK identificiramo s fenotipskimi znaki CD34 + Thy-1 + CD38Iow / 'c-kit / low - le 30 od teh celic povsem obnovi hematopoezo pri letalno obsevanih miših.

Iz analize splošnih fenotipskih značilnosti celic kostnega mozga dejansko začel 40 let intenzivnih raziskav GSK hkrati sposobna tako samoobnovitve in diferenciacijo do drugih celičnih elementov, ki omogoča, da upraviči uporabo presaditve kostnega mozga za zdravljenje različnih patologij hemopoietic sistema. Nedavno odkrili nove vrste izvornih celic še niso bili pogosto uporabljeni v klinični praksi. Vendar matičnih celic iz popkovine (mozga) krvi in fetalnih jetrih lahko znatno razširijo presaditev celic ne samo v hematologiji, ampak tudi na drugih področjih medicine, pa se razlikujejo od HSC kostnega mozga kot količinske učinkovitosti in kakovostne lastnosti.

Razpršilec hematopoetskih izvornih celic masa potrebni za presaditev na splošno dobimo iz kostnega mozga, periferne in popkovnične krvi, kot tudi embrionalnega jetrih. Poleg tega lahko hemopoetičnih predhodnih celic dobimo z in vitro razmnoževanje ESC in njihovo kasnejšo diferenciacijo v hematopoetske ciljni celični elementov. A. Petrenko, V. Grishchenko (2003) upravičeno opozarjajo pomembne razlike imunološke lastnosti in sposobnosti za ponovno vzpostavitev hematopoeze GSK drugačen izvor, zaradi neenake razmerja, vsebovanega v njihovih virov pluripotentnih zgodaj in kasneje predanih prednikov. Poleg tega imajo kvantitativno in kvalitativno hematopoetske izvorne celice, pridobljene iz različnih izvornih virov, popolnoma različna združenja ne-hemopoetskih celic.

Tradicionalni izvor hematopoetskih izvornih celic je kostni mozeg. Suspenzijo celic kostnega mozga se pridobiva iz trebušne kosti ali prsnice z izločanjem pod lokalno anestezijo. Tako dobljena suspenzija je heterogena in vsebuje mešanico HSC, elementov stromelnih celic, vezanih progenitornih celic mieloidnih in limfoidnih linij ter zrele krvne sestavine. Število celic s fenotipi CD34 + in CD34 + CD38 med mononuklearnimi celicami kostnega mozga je 0,5 do 3,6 in 0 do 0,5%. Periferna kri po mobilizaciji HSC, ki jo povzroča G-CSF, vsebuje 0,4-1,6% CD34 + in 0-0,4% CD34 + CD38.

Večji odstotek celic z CD34 + CD38 immunophenotype in CD34 + popkovnične krvi - in 0-0,6 OG 2,6%, in njihove največje število zazna med hematopoetičnih fetalnih jetrnih celic - in 2,3 0,2-12,5 -35,8%.

Vendar pa je kakovost presadka materiala ni odvisna samo od količine, ki jih vsebuje CD34 + celic, ampak tudi na njihovo funkcionalno aktivnost, ki jo je mogoče oceniti s stopnjo tvorbe kolonij in vivo (doselitvi mozga pri na smrt obsevanih živalih) ter in vitro - rasti kolonij na poltrdnih medijih . Ugotovljeno je bilo, da tvorbe kolonij in proliferativna aktivnost hemopoietic predniških celic s fenotipom CD34 + CD38 HLA-DR, izoliranega iz fetalnih jetrih, fetalne kostnega mozga in popkovnične krvi, ter močno presega povečanje možnosti hematopoetskih celic, ki tvorijo kolonije v kostnem mozgu in periferni krvi odraslega. Kvantitativna in kvalitativna analiza GSK različnega izvora pokazala pomembne razlike v njihovi relativni vsebine v celični suspenziji in funkcionalnost. Največje število CD34 + celic (24,6%) kot pri presadkov materiala, izdelanega iz fetalnih kostnega mozga. Kostni mozeg odraslega človeka vsebuje 2,1% CD34-pozitivnih celičnih elementov. Med mononuklearnih celic odraslega človeka periferni krvi le 0,5% imajo fenotip CD34 +, ker popkovnične krvi njihova višina ne doseže 2%. Tako sposobnost tvorjenja kolonij CD34 + celic fetalnih kostnega mozga za 2,7-krat presega zmogljivosti klonske rasti krvotvornih kostnem mozgu odraslih človeških celic in popkovnične krvi celice tvorijo znatno večje kolonije kot hematopoetičnih elementov izolirane iz periferne krvi odraslih: 65,5 do 40 in , 8 kolonij / 105 celic, respectively.

Razlike v proliferativno aktivnostjo in sposobnost, da tvorijo kolonijo hematopoetskih izvornih celic so povezane ne le z različnimi stopnjami zrelosti, ampak tudi njihove naravne mikrookolju. Znano je, da je hitrost intenzivnost proliferacije in diferenciacije matičnih celic določena z integralnim regulativnim vplivom večkomponentnega sistema rastnimi faktorji in citokini, ki jih izdelajo tako izvornih celic in celičnih elementov matričnega-stromalni mikrookolju. Uporaba populacij očiščeno celično in medijem brez seruma z namenom celični kulturi daje značilen po rastnih faktorjev, ki imajo stimulativni in deluje zaviralno na izvornih celicah različnih nivojih, zarodnih celic in celic, dodeljenih v določenem linearni smeri. Rezultati izvedenih študij prepričljivo dokazujejo, da se GSK, pridobljen iz virov z različnimi stopnjami ontogenetskega razvoja, razlikuje tako fenotipsko kot funkcionalno. Za GSK, ki ostanejo v zgodnejših fazah ontogeneze, za katere je značilen velik potencial za samoprevojevanje in visoko proliferativno aktivnost. Takšne celice se odlikujejo z daljšo dolžino telomerov in so podvržene zavezovanju s tvorbo vseh hematopoetskih celičnih linij. Reakcija imunskega sistema na HSC embrionalni izvor je odložena, saj takšne celice rahlo izražajo molekule HLA. Jasno je, stopnjevanje relativne vsebnosti HSCs in njihovo sposobnost, da sami obnovijo in število linij tvorijo vrst predan: CD34 + celic fetalnih jetrih> CD34 + celic popkovnične krvi> CD34 + celice kostnega mozga. Pomembno je, da so te razlike ni značilna le za promet znotraj in neo postanatalnomu zgodnje obdobje človekovega razvoja, ampak tudi v celotni zorenjem - proliferacije, in dejavnost oblikovanje kolonija HSCs izhaja iz kostnega mozga ali periferne krvi odraslega, obratno sorazmerno s starostjo darovalca.