Krvotvorne matične celice

Hematopoetske matične celice (HSC), tako kot mezenhimske progenitorske celice, so multipotentne in dajejo nastanek celičnih linij, katerih končni elementi tvorijo oblikovane elemente krvi, pa tudi številne specializirane tkivne celice imunskega sistema.

Hipoteza o obstoju skupnega predhodnika vseh krvnih celic, pa tudi sam izraz "matična celica", pripada A. Maksimovu (1909). Potencial za nastanek celične mase v HSC je ogromen - matične celice kostnega mozga dnevno proizvedejo 10 celic, ki sestavljajo oblikovane elemente periferne krvi. Samo dejstvo obstoja hematopoetskih matičnih celic je bilo ugotovljeno leta 1961 v poskusih obnove hematopoeze pri miših, ki so prejele smrtonosni odmerek radioaktivnega obsevanja, ki uničuje matične celice kostnega mozga. Po presaditvi singenetskih celic kostnega mozga takim smrtonosno obsevanim živalim so v vranici prejemnikov našli diskretna žarišča hematopoeze, katerih vir so bile posamezne klonogene predhodne celice.

Nato je bila dokazana sposobnost hematopoetskih matičnih celic za samovzdrževanje, ki zagotavlja funkcijo hematopoeze v procesu ontogeneze. V procesu embrionalnega razvoja se HSC odlikujejo po visoki migracijski aktivnosti, ki je potrebna za njihovo premikanje v cone nastajanja hematopoetskih organov. Ta lastnost HSC se ohranja tudi v ontogenezi - zaradi njihove nenehne migracije pride do stalne obnove bazena imunokompetentnih celic. Sposobnost HSC za migracijo, prodiranje skozi histohematske ovire, vsaditev v tkiva in klonogeno rast je služila kot osnova za presaditev celic kostnega mozga pri številnih boleznih, povezanih s patologijo hematopoetskega sistema.

Tako kot vsi viri matičnih celic so tudi hematopoetske matične celice prisotne v svoji niši (kostni mozeg) v zelo majhnih količinah, kar povzroča določene težave pri njihovi izolaciji. Imunofenotipsko so človeške HSC označene kot CD34+NK celice, ki so sposobne migracije v krvni obtok in naselitve organov imunskega sistema ali repopulacije strome kostnega mozga. Jasno je treba razumeti, da HSC niso najbolj nezrele celice kostnega mozga, temveč izvirajo iz predhodnikov, ki vključujejo mirujoče fibroblastom podobne CD34-negativne celice. Ugotovljeno je bilo, da so celice s fenotipom CD34 sposobne vstopiti v splošni krvni obtok, kjer spremenijo svoj fenotip v CD34+, vendar po povratni migraciji v kostni mozeg pod vplivom mikrookolja ponovno postanejo elementi CD34-negativnih matičnih celic. V stanju mirovanja se celice CD34~ ne odzivajo na parakrine regulatorne signale strome (rastni faktorji, citokini). Vendar pa se v situacijah, ki zahtevajo povečano intenzivnost hematopoeze, matične celice s fenotipom CD34 odzivajo na diferenciacijske signale z tvorbo tako hematopoetskih kot mezenhimskih progenitorskih celic. Hematopoeza poteka z neposrednim stikom HSC s celičnimi elementi strome kostnega mozga, ki jo predstavlja kompleksna mreža makrofagov, retikularnih endotelijskih celic, osteoblastov, stromalnih fibroblastov in zunajceličnega matriksa. Stromalna osnova kostnega mozga ni le matrica ali "okostje" za hematopoetsko tkivo; izvaja fino regulacijo hematopoeze zaradi parakrinih regulatornih signalov rastnih faktorjev, citokinov in kemokinov ter zagotavlja tudi adhezivne interakcije, potrebne za tvorbo krvnih celic.

Tako nenehno obnavljajoči se sistem hematopoeze temelji na polipotentni (z vidika hematopoeze) hematopoetski matični celici, ki je sposobna dolgotrajnega samovzdrževanja. V procesu zaveze se HSC-ji podvržejo primarni diferenciaciji in tvorijo klone celic, ki se razlikujejo po citomorfoloških in imunofenotipskih značilnostih. Zaporedno nastajanje primitivnih in zavezanih progenitorskih celic se konča z nastankom morfološko prepoznavnih progenitorskih celic različnih hematopoetskih linij. Rezultat zaporednih faz kompleksnega večstopenjskega procesa hematopoeze je zorenje celic in sproščanje zrelih oblikovanih elementov v periferno kri - eritrocitov, levkocitov, limfocitov in trombocitov.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ]

Viri hematopoetskih matičnih celic

Hematopoetske matične celice veljajo za najbolj raziskan vir matičnih celic, kar je v veliki meri posledica njihove klinične uporabe pri presaditvi kostnega mozga. Na prvi pogled je o teh celicah znanega kar precej. Do neke mere to drži, saj so vmesni in zreli potomci HSC najbolj dostopni celični elementi, od katerih je bil vsak (eritrociti, levkociti, limfociti, monociti/makrofagi in trombociti) skrbno preučen na vseh ravneh - od svetlobne do elektronske mikroskopije, od biokemijskih in imunofenotipskih značilnosti do identifikacije z metodami PCR analize. Vendar pa spremljanje morfoloških, ultrastrukturnih, biokemijskih, imunofenotipskih, biofizikalnih in genomskih parametrov HSC ni dalo odgovorov na številna problematična vprašanja, katerih rešitev je potrebna za razvoj celične transplantologije. Mehanizmi stabilizacije hematopoetskih matičnih celic v mirujočem stanju, njihova aktivacija, vstop v fazo simetrične ali asimetrične delitve in, kar je najpomembneje, zavezanost k tvorbi tako funkcionalno različnih oblikovanih elementov krvi, kot so eritrociti, levkociti, limfociti in trombociti, še niso ugotovljeni.

Prisotnost celic s fenotipom CD34 v kostnem mozgu, ki so predhodnice tako mezenhimskih kot hematopoetskih matičnih celic, je sprožila vprašanje o obstoju najzgodnejših predhodnikov celične diferenciacije v stromalne in hematopoetske linije, blizu CD34-negativnim celicam. Z metodo dolgotrajne gojenja so pridobili tako imenovane celice, ki iniciirajo dolgoletno kulturo (LTC-IC). Življenjska doba takšnih predhodniških celic z aktivnostjo tvorbe kolonij na stromalni osnovi kostnega mozga z določeno kombinacijo rastnih faktorjev presega 5 tednov, medtem ko je viabilnost enot, ki tvorijo kolonije (CFU), v kulturi le 3 tedne. Trenutno velja LTC-IC za funkcionalni analog HSC, saj je z visokim potencialom repopulacije približno 20 % LTC-IC značilnih za fenotip CD34+CD38- in kažejo visoko sposobnost samoobnavljanja. Takšne celice najdemo v človeškem kostnem mozgu s frekvenco 1:50.000. Vendar pa je treba celice, ki iniciirajo mieloidno-limfoidno rast in jih pridobimo v dolgotrajnih (15 tednih) pogojih gojenja, prepoznati kot najbližje HSC. Takšne celice, označene kot LTC, spadajo med celice kostnega mozga pri ljudeh in jih najdemo 10-krat manj pogosto kot LTC-IC ter tvorijo celične linije tako mieloidnih kot limfoidnih hematopoetskih linij.

Čeprav je označevanje hematopoetskih matičnih celic z monoklonskimi protitelesi, ki mu sledi imunofenotipska identifikacija, glavna metoda za prepoznavanje in selektivno sortiranje hematopoetskih celic s matičnim potencialom, je klinična uporaba tako izoliranih HSC omejena. Blokiranje receptorja CD34 ali drugih markernih antigenov s protitelesi med imunopozitivnim sortiranjem neizogibno spremeni lastnosti celice, izolirane z njegovo pomočjo. Imunonegativna izolacija HSC na magnetnih kolonah velja za bolj zaželeno. Vendar se v tem primeru za sortiranje običajno uporabljajo monoklonska protitelesa, fiksirana na kovinskem nosilcu. Poleg tega, kar je pomembno, obe metodi izolacije HSC temeljita na fenotipskih in ne na funkcionalnih značilnostih. Zato mnogi raziskovalci raje uporabljajo analizo klonogenih parametrov HSC, ki omogoča določitev stopnje zrelosti in smeri diferenciacije progenitornih celic glede na velikost in sestavo kolonij. Znano je, da se med procesom vezave število celic in njihove vrste v koloniji zmanjša. Hematopoetska matična celica in njena zgodnja hčerinska celica, imenovana »enota za tvorbo kolonij granulocitov-eritrocitov-monocitov-megakariocitov« (CFU-GEMM), v kulturi ustvarjata velike večvrstne kolonije, ki vsebujejo granulocite, eritrocite, monocite oziroma megakariocite. Enota za tvorbo kolonij granulocitov-monocitov (CFU-GM), ki se nahaja vzdolž linije zaveze, tvori kolonije granulocitov in makrofagov, enota za tvorbo kolonij granulocitov (CFU-G) pa tvori le majhno kolonijo zrelih granulocitov. Zgodnji predhodnik eritrocitov, enota eritrocitov, ki tvori porušitev (CFU-E), je vir velikih kolonij eritrocitov, zrelejša enota eritrocitov, ki tvori kolonije (CFU-E), pa je vir majhnih kolonij eritrocitov. Na splošno lahko pri rasti celic na poltrdnih gojiščih prepoznamo celice, ki tvorijo šest vrst mieloidnih kolonij: CFU-GEMM, CFU-GM, CFU-G, CFU-M, BFU-E in CFU-E).

Vendar pa poleg hematopoetskih derivatov vsak izvorni material za izolacijo HSC vsebuje tudi znatno število spremljajočih celic. V zvezi s tem je potrebno predhodno čiščenje presadka, najprej iz aktivnih celic imunskega sistema darovalca. Običajno se za ta namen uporablja imunoselekcija, ki temelji na izražanju specifičnih antigenov s strani limfocitov, kar omogoča njihovo izolacijo in odstranitev z uporabo monoklonskih protiteles. Poleg tega je bila razvita imunorozetna metoda izčrpavanja T-limfocitov v presadku kostnega mozga, ki temelji na tvorbi kompleksov CD4+ limfocitov in specifičnih monoklonskih protiteles, ki se učinkovito odstranijo z aferezo. Ta metoda zagotavlja proizvodnjo prečiščenega celičnega materiala s 40–60 % vsebnostjo hematopoetskih matičnih celic.

Povečanje števila progenitorskih celic zaradi odstranitve zrelih oblikovanih elementov krvi iz produkta levkafereze se doseže s protitočnim centrifugiranjem, ki mu sledi filtracija (v prisotnosti kelatorja - trinatrijevega citrata) skozi kolone, ki vsebujejo najlonska vlakna, prevlečena s humanim imunoglobulinom. Zaporedna uporaba teh dveh metod zagotavlja popolno čiščenje presadka iz trombocitov, 89 % iz eritrocitov in 91 % iz levkocitov. Zaradi znatnega zmanjšanja izgube HSC se lahko raven celic CD34+ v skupni celični masi poveča na 50 %.

Sposobnost izoliranih hematopoetskih matičnih celic, da v kulturi tvorijo kolonije zrelih krvnih celic, se uporablja za funkcionalno karakterizacijo celic. Analiza nastalih kolonij omogoča identifikacijo in kvantifikacijo vrst progenitorskih celic, stopnje njihove vezave in določitev smeri njihove diferenciacije. Klonogena aktivnost se določa v poltrdnih medijih na metilcelulozi, agarju, plazmi ali fibrinskem gelu, ki zmanjšujejo migracijsko aktivnost celic in preprečujejo njihovo pritrditev na površino stekla ali plastike. V optimalnih pogojih gojenja se kloni razvijejo iz ene same celice v 7–18 dneh. Če klon vsebuje manj kot 50 celic, se identificira kot ena sama skupina; če število celic presega 50, se identificira kot kolonija. Upošteva se število celic, ki so sposobne tvoriti kolonijo (enote, ki tvorijo kolonije - CFU ali celice, ki tvorijo kolonije - COC). Treba je opozoriti, da parametra CFU in COC ne ustrezata številu HSC v celični suspenziji, čeprav se z njim ujemajo, kar še enkrat poudarja potrebo po določanju funkcionalne (kolonijetvorne) aktivnosti HSC in vitro.

Med celicami kostnega mozga imajo hematopoetske matične celice najvišji proliferativni potencial, zaradi česar v kulturi tvorijo največje kolonije. Število takšnih kolonij naj bi posredno določalo število matičnih celic. Po nastanku kolonij in vitro, ki presegajo 0,5 mm v premeru in imajo število celic več kot 1000, so avtorji testirali takšne celice na odpornost na subletalne odmerke 5-fluorouracila in preučevali njihovo sposobnost ponovne naselitve kostnega mozga smrtno obsevanih živali. Glede na določene parametre so bile izolirane celice skoraj nerazločljive od HSC in so prejele kratico HPP-CFC - celice, ki tvorijo kolonije, z visokim proliferativnim potencialom.

Iskanje kakovostnejše izolacije hematopoetskih matičnih celic se nadaljuje. Vendar so hematopoetske matične celice morfološko podobne limfocitom in predstavljajo relativno homogen niz celic s skoraj okroglimi jedri, fino razpršenim kromatinom in majhno količino šibko bazofilne citoplazme. Tudi njihovo natančno število je težko določiti. Domneva se, da se HSC v človeškem kostnem mozgu pojavljajo s frekvenco 1 na 106 jedrnih celic.

Identifikacija hematopoetskih matičnih celic

Za izboljšanje kakovosti identifikacije hematopoetskih matičnih celic se izvaja zaporedna ali sočasna (na večkanalnem sorterju) študija spektra membransko vezanih antigenov, pri HSC pa je treba fenotip CD34+CD38 kombinirati z odsotnostjo linearnih diferenciacijskih markerjev, zlasti antigenov imunokompetentnih celic, kot so CD4, površinski imunoglobulini in glikoforin.

Skoraj vse sheme fenotipizacije hematopoetskih matičnih celic vključujejo določitev antigena CD34. Ta glikoprotein z molekulsko maso približno 110 kDa, ki nosi več glikozilacijskih mest, se po aktivaciji ustreznega gena, lokaliziranega na kromosomu 1, izrazi na membrani plazemskih celic. Funkcija molekule CD34 je povezana z interakcijo zgodnjih hematopoetskih progenitorskih celic s stromalno osnovo kostnega mozga, ki jo posreduje L-selektin. Vendar je treba vedeti, da prisotnost antigena CD34 na površini celic omogoča le predhodno oceno vsebnosti HSC v celični suspenziji, saj ga izražajo tudi druge hematopoetske progenitorske celice, pa tudi stromalne celice kostnega mozga in endotelijske celice.

Med diferenciacijo hematopoetskih progenitorskih celic se izražanje CD34 trajno zmanjša. Eritrocitne, granulocitne in monocitne predniške celice bodisi šibko izražajo antigen CD34 bodisi ga sploh ne izražajo na svoji površini (fenotip CD34). Antigen CD34 ni zaznan na površinski membrani diferenciranih celic kostnega mozga in zrelih krvnih celic.

Treba je opozoriti, da se v dinamiki diferenciacije hematopoetskih progenitorskih celic ne zmanjšuje le raven izražanja CD34, temveč se progresivno povečuje tudi izražanje antigena CD38, integralnega membranskega glikoproteina z molekulsko maso 46 kDa, ki ima aktivnost NAD-glikohidrolaze in ADP-ribozil ciklaze, kar kaže na njegovo sodelovanje pri transportu in sintezi ADP-riboze. Tako se pojavi možnost dvojnega nadzora nad stopnjo vezave hematopoetskih progenitorskih celic. Populacija celic s fenotipom CD34+CD38+, ki predstavlja od 90 do 99 % CD34-pozitivnih celic kostnega mozga, vsebuje progenitorske celice z omejenim proliferativnim in diferenciacijskim potencialom, medtem ko lahko celice s fenotipom CD34+CD38 prevzamejo vlogo HSC.

Dejansko populacija celic kostnega mozga, opisana s formulo CD34+CD38-, vsebuje relativno veliko število primitivnih matičnih celic, ki se lahko diferencirajo v mieloidni in limfoidni smeri. V pogojih dolgotrajnega gojenja celic s fenotipom CD34+CD38- je mogoče pridobiti vse zrele oblikovane elemente krvi: nevtrofilce, eozinofile, bazofile, monocite, megakariocite, eritrocite in limfocite.

Relativno pred kratkim je bilo ugotovljeno, da CD34-pozitivne celice izražajo še dva markerja, AC133 in CD90 (Thy-1), ki se uporabljata tudi za identifikacijo hematopoetskih matičnih celic. Antigen Thy-1 se sočasno izraža z receptorjem CD117 (c-kit) na celicah CD34+ kostnega mozga, popkovine in periferne krvi. Gre za površinski glikoprotein, ki veže fosfatidilinozitol, z molekulsko maso 25–35 kDa in sodeluje v procesih celične adhezije. Nekateri avtorji menijo, da je antigen Thy-1 marker najbolj nezrelih CD34-pozitivnih celic. Samoreproducirajoče se celice s fenotipom CD34+Thy-1+ dajejo dolgoročno gojene linije z nastankom hčerinskih celic. Domneva se, da antigen Thy-1 blokira regulatorne signale, ki povzročajo zaustavitev delitve celic. Kljub temu, da so celice CD34+Thy1+ sposobne samoreprodukcije in ustvarjanja dolgotrajnih gojenih linij, njihovega fenotipa ni mogoče pripisati izključno HSC, saj je vsebnost Thy-1+ v skupni masi CD34-pozitivnih celičnih elementov približno 50 %, kar znatno presega število hematopoetskih celic.

Za identifikacijo hematopoetskih matičnih celic je bolj obetaven AC133 - antigenski označevalec hematopoetskih progenitorskih celic, katerega izražanje so prvič zaznali na embrionalnih jetrnih celicah. AC133 je transmembranski glikoprotein, ki se pojavi na površini celične membrane v najzgodnejših fazah zorenja HSC - možno je, da celo prej kot antigen CD34. V študijah A. Petrenka in V. Grishčenka (2003) je bilo ugotovljeno, da AC133 izraža do 30 % CD34-pozitivnih embrionalnih jetrnih celic.

Idealni fenotipski profil hematopoetskih matičnih celic je torej po trenutnih konceptih sestavljen iz celičnega obrisa, katerega konture bi morale vključevati konfiguracije antigenov CD34, AC133 in Thy-1, vendar ni prostora za molekularne projekcije CD38, HLA-DR in linearne diferenciacijske markerje GPA, CD3, CD4, CD8, CD10, CD14, CD16, CD19, CD20.

Različica fenotipskega portreta HSC je lahko kombinacija CD34+CD45RalowCD71low, saj se lastnosti celic, opisane s to formulo, ne razlikujejo od funkcionalnih parametrov celic s fenotipom CD34+CD38. Poleg tega lahko človeške HSC prepoznamo po fenotipskih značilnostih CD34+Thy-l+CD38Iow/'c-kit/low - le 30 takšnih celic popolnoma obnovi hematopoezo pri smrtno obsevanih miših.

40-letno obdobje intenzivnih raziskav HSC, ki so sposobne tako samoreprodukcije kot diferenciacije v druge celične elemente, se je začelo z analizo splošnih fenotipskih značilnosti celic kostnega mozga, kar je omogočilo utemeljitev uporabe presaditve kostnega mozga za zdravljenje različnih patologij hematopoetskega sistema. Nove vrste matičnih celic, odkrite kasneje, še niso bile široko uporabljene v klinični praksi. Hkrati pa so matične celice popkovnične krvi in embrionalnih jeter sposobne znatno razširiti obseg presaditve celic ne le v hematologiji, temveč tudi na drugih področjih medicine, saj se od HSC kostnega mozga razlikujejo tako po kvantitativnih kot kvalitativnih značilnostih.

Volumen mase hematopoetskih matičnih celic, potreben za presaditev, se običajno pridobi iz kostnega mozga, periferne in popkovnične krvi ter embrionalnih jeter. Poleg tega je mogoče hematopoetske progenitorske celice pridobiti in vitro z množenjem embrionalnih matičnih celic (ESC) z njihovo naknadno usmerjeno diferenciacijo v hematopoetske celične elemente. A. Petrenko in V. Grishchenko (2003) upravičeno ugotavljata pomembne razlike v imunoloških lastnostih in sposobnosti obnavljanja hematopoeze HSC različnega izvora, kar je posledica neenakega razmerja med zgodnjimi pluripotentnimi in pozno zavezanimi progenitorskimi celicami v njihovih virih. Poleg tega so za hematopoetske matične celice, pridobljene iz različnih matičnih virov, značilne kvantitativno in kvalitativno popolnoma različne asociacije nehematopoetskih celic.

Kostni mozeg je že postal tradicionalen vir hematopoetskih matičnih celic. Suspenzija celic kostnega mozga se pridobiva iz iliuma ali prsnice z izpiranjem pod lokalno anestezijo. Tako pridobljena suspenzija je heterogena in vsebuje mešanico HSC, stromalnih celičnih elementov, zavezanih progenitorskih celic mieloidne in limfoidne linije ter zrelih oblikovanih elementov krvi. Število celic s fenotipoma CD34+ in CD34+CD38 med mononuklearnimi celicami kostnega mozga je 0,5–3,6 oziroma 0–0,5 %. Periferna kri po mobilizaciji HSC, ki jo povzroči G-CSF, vsebuje 0,4–1,6 % CD34+ in 0–0,4 % CD34+CD38.

Odstotek celic z imunofenotipoma CD34+CD38 in CD34+ je višji v popkovnični krvi - 0-0,6 oziroma 1-2,6 %, njihovo največje število pa je zaznano med hematopoetskimi celicami embrionalnih jeter - 0,2-12,5 oziroma 2,3-35,8 %.

Vendar pa kakovost presajenega materiala ni odvisna le od števila celic CD34+, ki jih vsebuje, temveč tudi od njihove funkcionalne aktivnosti, ki jo je mogoče oceniti s stopnjo tvorbe kolonij in vivo (ponovna populacija kostnega mozga pri smrtno obsevanih živalih) in in vitro - z rastjo kolonij na poltekočih gojiščih. Izkazalo se je, da aktivnost tvorbe kolonij in proliferacije hematopoetskih progenitorskih celic s fenotipom CD34+CD38 HLA-DR, izoliranih iz embrionalnih jeter, fetalnega kostnega mozga in popkovnične krvi, znatno presega proliferativni in kolonialni potencial hematopoetskih celic kostnega mozga in periferne krvi odrasle osebe. Kvantitativna in kvalitativna analiza HSC različnega izvora je pokazala pomembne razlike tako v njihovi relativni vsebnosti v celični suspenziji kot v funkcionalnih zmogljivostih. Največje število celic CD34+ (24,6 %) je bilo ugotovljeno v presajenem materialu, pridobljenem iz fetalnega kostnega mozga. Kostni mozeg odrasle osebe vsebuje 2,1 % CD34-pozitivnih celičnih elementov. Med mononuklearnimi celicami periferne krvi odraslega ima le 0,5 % fenotip CD34+, medtem ko v popkovnični krvi njihovo število doseže 2 %. Hkrati je sposobnost tvorbe kolonij celic CD34+ fetalnega kostnega mozga 2,7-krat večja od sposobnosti klonske rasti hematopoetskih celic kostnega mozga odraslega, celice popkovnične krvi pa tvorijo bistveno več kolonij kot hematopoetski elementi, izolirani iz periferne krvi odraslih: 65,5 oziroma 40,8 kolonij/105 celic.

Razlike v proliferativni aktivnosti in sposobnosti tvorbe kolonij hematopoetskih matičnih celic niso povezane le z različnimi stopnjami njihove zrelosti, temveč tudi z njihovim naravnim mikrookoljem. Znano je, da intenzivnost proliferacije in hitrost diferenciacije matičnih celic določata celostni regulativni učinek večkomponentnega sistema rastnih faktorjev in citokinov, ki jih proizvajajo tako same matične celice kot celični elementi njihovega matriksno-stromalnega mikrookolja. Uporaba prečiščenih celičnih populacij in serumskih medijev za gojenje celic je omogočila karakterizacijo rastnih faktorjev, ki imajo stimulativni in zaviralni učinek na matične celice različnih ravni, progenitorske celice in celice, ki so zavezane v eno ali drugo linearno smer. Rezultati študij prepričljivo kažejo, da se HSC, pridobljene iz virov z različnimi stopnjami ontogenetskega razvoja, razlikujejo tako fenotipsko kot funkcionalno. HSC v zgodnejših fazah ontogeneze so značilne po visokem potencialu samoreprodukcije in visoki proliferativni aktivnosti. Takšne celice se odlikujejo po daljših telomerah in so podvržene zavezanosti k tvorbi vseh hematopoetskih celičnih linij. Odziv imunskega sistema na HSC embrionalnega izvora je zakasnjen, saj takšne celice šibko izražajo molekule HLA. Obstaja jasna gradacija relativne vsebnosti HSC, njihove sposobnosti samoobnavljanja in števila vrst linij zavezanosti, ki jih tvorijo: CD34+ celice embrionalnih jeter > CD34+ celice popkovnične krvi > CD34+ celice kostnega mozga. Pomembno je, da so takšne razlike lastne ne le intra-, neo- in zgodnjemu postnatalnemu obdobju človeškega razvoja, temveč tudi celotni ontogenezi – proliferativna in koloniozna aktivnost HSC, pridobljenih iz kostnega mozga ali periferne krvi odrasle osebe, je obratno sorazmerna s starostjo darovalca.