Hematopoetske izvorne celice rumenega jajčeca

Očitno je, da različne proliferacije in diferenciacije krvotvornih matičnih celic jakosti zaradi posebnosti njihovega ontogenetskem razvoja, saj v procesu ontogenesis v človeški spremembo celo lokalizacijo glavnih področij hematopoeze. Hematopoetske progenitorne celice žolčnika v plodu ploda so namenjene nastanku izključno eritropoetske celične linije. Po selitvi primarnega GSK v jetra in vranico v mikrookolju teh organov se spekter linij komisije širi. Zlasti hematopoetske matične celice pridobijo sposobnost ustvarjanja limfoidnih linij. V prenatalnem obdobju hemopoetske celice prekurzorjev dosežejo območje končne lokalizacije in kolonizirajo kostni mozeg. V procesu razvoja ploda v krvi ploda vsebuje znatno število matičnih hemopoetskih celic. Na primer, v 13. Tednu nosečnosti raven HSC doseže 18% skupnega števila mononuklearnih krvnih celic. V prihodnosti se progresivno zmanjšuje njihova vsebina, vendar še pred rojstvom se količina HSC v popkovnični krvi malo razlikuje od njihovega števila v kostnem mozgu.

Po klasičnih idej, je naravna sprememba pri lokalizaciji hematopoeze v embrionalni razvoj sesalcev, ki jo je izvedla migracijo in izvajanje nove mikrookolja pluripotentnih hematopoetskih matičnih celic - od hranilni mešiček v jetrih, vranici in kostnem mozgu. Od zgodnjih fazah embrionalni razvoj hematopoetične tkiva vsebuje veliko število izvornih celic, ki zmanjšuje kot brejosti, najbolj obetavne za pridobitev hemopoetičnih matičnih celic se šteje hematopoetski fetalnih jeter tkiva izoliramo iz abortnogo materiala na 5-8 tednov gestacije.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]

Izvor hematopoetskih matičnih celic

Dejstvo, da ploda proizvodnja rdečih krvnih celic izvira iz krvi otokov hranilni mešiček, brez dvoma. Vendar pa je in vitro diferenciacija potencial hematopoetski x hranilni mešiček celic malo (ti razlikujejo predvsem eritrociti). Opozoriti je treba, da je presaditev hematopoetskih matičnih celic hranilni mešiček ne more obnoviti hematopoeze za dolgo časa. Izkazalo se je, da te celice niso predhodniki GSK odraslega organizma. Res je GSK pojavi prej, pri 3-5 tednih razvoja ploda, v območju nastanek želodčnega tkiva in endotelija krvnih žil (paraaortnega splanchnopleura, P-SP), in namesto zaznamkov aorta Gonadni in primarni ledvice - na področju ali tako mesonephros imenovano AGM-območje. Pokazalo se je, da so celice AGM-regija ni samo vir HSC, vendar endotelijske celice krvnih žil, in osteoklastov, procesi, ki sodelujejo pri oblikovanju kosti. Na 6. Tednu nosečnosti zgodaj hematopoetske matičnih celic iz AGM-daljinsko potovanja na jetrih, ki je glavni krvotvornih organov ploda pred rojstvom.

Ker je ta točka zelo pomembna za presaditev celic, problem izvora HSCs med zarodka človeka zasluži podrobnejšo predstavitev. Klasična ideja, da hematopoetske matične celice sesalcev in ptic, ki izhajajo iz adneksov virov, ki temeljijo na raziskavah Metcalf in Moore, ki je prvič uporabili kloniranje tehnike GSK in njihovih potomcev, izolirano od hranilni mešiček. Rezultati njihovega dela so bili osnova za teorijo migracij, v skladu s katerim GSK, prvič pojavila v hranilni mešiček, dosledno zasedajo prehodne in končne hemopoetičnih organov v procesu nastajanja v svojih mikrookolja. In tako je bilo ugotovljeno tudi stališče, da je generacija GSK sprva lokalizirana v hranilni mešiček, celični osnova za dokončno hematopoeze.

Hematopoetskih matičnih celic iz rumenjakov mešiček so med najbolj zgodnjih hematopoietičnih matičnih celic. Njihov fenotip AA4.1 + CD34 + c-kit + opisano. Za razliko HSCs zreli kostnega mozga, ne izražajo antigene SCA-1 in molekulo MHC. Zdi se, da je pojav antigenov marker na površini membrane GSK hranilni mešiček z gojenjem ustreza njihovo diferenciacijo v embrionalni razvoj s tvorbo dodeljenih linij hemopoezo: zmanjšuje nivo ekspresije CD34 antigen in Thy-1 poveča ekspresijo CD38 in CD45RA, prikazani HLA-DR molekule. V naknadno s citokini in rastnih faktorjev povzročene, in vitro ekspresijo specializacije začne antigene specifične za hematopoetskih zarodnih celic posameznega celične linije. Vendar pa so rezultati raziskave iz zarodka hematopoeze v predstavniki treh razredov vretenčarjev (dvoživk, ptic in sesalcev), in zlasti analiza izvora HSCs so odgovorni za dokončno hematopoeze v poporodni ontogenesis, v nasprotju s klasičnimi idej. Ugotovljeno je bilo, da so se predstavniki vseh zgoraj navedenih razredov v embriogeneze na oblikovali dva neodvisna območja, ki se soočajo GSK. Ekstraembrionalne "klasično" regija zastopana hranilni mešiček ali njegove analoge, medtem ko je nedavno ugotovili intraembrionalnaya HSC lokalizacije območju obsega para-aortno mesenchyme in AGM-območje. Danes je mogoče trditi, da so dvoživke in ptice dokončne HSCs, ki izhajajo iz intraembrionalnyh virov, medtem ko se pri sesalcih in človeku GSK del hranilni mešiček v dokončni hematopoeze še vedno nemogoče popolnoma odpraviti.

Embrionalne hematopoeze v hranilni mešiček bistvu primarno eritropoezo, za katero je značilno ohranjanje jedra na vseh stopnjah eritrocitov zorenja in vrsto sinteze hemoglobina ploda. V skladu z najnovejšimi podatki se val primarnega eritropoeze konča v rumeni vrečki na osmem dnevu razvoja zarodka. Temu sledi obdobje kopičenja dokončna eritroidne matičnih celic - BFU-E, ki se oblikujejo izključno v hranilni mešiček in se prvič pojavili na 9. Dan brejosti. Naslednja faza embriogeneze že tvori dokončne eritroidne progenitorne celice - CFU-E, kot tudi (!) Mastve in CFU-GM. Temelji na obstoju tega vidika, da nastanejo dokončne matičnih celic v hranilni mešiček, migrirajo skozi krvni obtok, se kopičijo v jetrih in hitro sprožila prvo fazo intraembrionalnogo hematopoeze. Po takšnih predstavništev, lahko hranilni mešiček šteje, na eni strani, kot mesto primarnega eritropoezo, in drugi - kot prvi vir dokončnih hematopoetske predhodnikov celic v embrionalni razvoj.

Izkazalo se je, da so celice, ki tvorijo kolonije z visoko proliferativni potencial lahko izolirane od je hranilni mešiček že 8. Dan nosečnosti, to je že dolgo pred zaključkom žilnega sistema vrečko zarodkov in rumenjaka. Poleg tega izhaja iz hranilni mešiček z visoko proliferativno potenciala in vitro celice, ki tvorijo kolonije, velikost in celična zmes, ki se ne razlikujejo od ustreznih parametrov rasti kulture izvornih celic kostnega mozga. Hkrati, s kolonijo retransplantacija hranilni mešiček celice z visoko proliferativno potencialom oblikovanih bistveno več tvorjenja kolonij celice in hči multipotentne predniške celice, kot z kostnega mozga hemopoetičnih predhodnih celic.

Končna ugotovitev o vlogi hematopoetskih izvornih celic v hranilni mešiček dokončne hematopoeze lahko dobimo rezultate v katerih avtorji dobljene linijo endotelijskih celic hranilni mešiček (G166), ki učinkovito podpirajo njegovo celično proliferacijo z fenotipskih in funkcionalnih lastnostih HSC (AA4.1 + WGA +, z nizko gostoto in slabo oprijemljiv). Vsebina najpozneje pri kultiviramo na hranilni sloj celic v S166 za 8 dni povečala za več kot 100-krat. Mešani kolonije rastejo na podsloj celične linije S166, smo identificirali makrofagov granulocitov, megakariocitov, monocitov in udarnimi celice in njihove predhodne celice B in T limfocitov. Hranilni mešiček celice, raste na Podrazina endotelijskih celic, imajo sposobnost, da sam in je potekala reprodukcije v poskusih avtorjev treh prehodov. Okrevanje skoznje hematopoeze v miših odraslih s huda kombinirana imunska pomanjkljivost (SCID) spremlja nastanek vseh vrst levkocitov, kakor tudi T in B limfocitov. Vendar pa avtorji v svojih raziskavah uporabljajo celice hranilni mešiček 10-dnevnega zarodek, iz katerega se je izvensodnih in intraembrionalnye žilni sistem že zaprt, da ne izključuje prisotnost med celicami hranilni mešiček GSK intraembrionalnogo izvora.

Hkrati, analiza diferenciacije potenciala hematopoetičnih celic zgodnji stopnji razvoja, pred združitvijo izbrano vaskularni sistem zarodka in hranilni mešiček (8-8.5 dni nosečnosti) je pokazala prisotnost prekurzorjev celic T in B v hranilni mešiček, ne pa tudi v telesu zarodka . In vitro metoda sistema za kultiviranje dvostopenjskem na enojno plast epitelnih in subepitelno celicah mononuklearnih celic timusno diferencirane v hranilni mešiček vnaprejšnjega T in zrele limfocite T. Pod enakimi pogoji gojenja, ampak na enojno plast stromalnih celic jeter in kostnega mozga mononuklearnih celicah hranilni mešiček diferencirane v celice predhodno B in zrelih IglVT-B-limfocitov.

Rezultati te študije kažejo na možnost razvoja celice imunskega sistema iz ekstraembrionalne hranilni mešiček tkiva, nastanek primarne T in celičnih linij B odvisna od faktorjev hematopoetski stromalni mikrookolje od embrionalnih organov.

Drugi avtorji tudi pokazala, da hranilni mešiček celice potence obsega limfoidnega diferenciacijo in oblikovana limfociti se ne razlikujejo od tistih antigenskih lastnosti pri odraslih živalih. To je bilo, da lahko celice hranilni mešiček 8-9 dni zarodka obnoviti timusnega limfopoietično v atimotsitarnom s pojavom zrelega CD3 + CD4 + - limfocitov in CD8 + SDZ +, ki ima okrašeno repertoar T celičnih receptorjev. Tako lahko timus se naselijo celice adneksov porekla, vendar je nemogoče izključiti možnost migracije na timus matičnih celic, ki jih limfocitov T iz intraembrionalnyh virov limfopoietično.

Vendar presaditev hematopoetskih celic hranilni mešiček v obsevanih prejemnikov odraslih ni vedno končali doselitvi dolgo opustošena območja hematopoetski tkivo lokalizacija, a vitro celice iz rumenjakov mešiček tvorijo vranične kolonije veliko manjše, kot so celice AGM območja. V nekaterih primerih, prek hranilni mešiček celice 9-dnevnega zarodka je še vedno mogoče doseči dolgoročno (do 6 mesecev) doselitvi krvotvorni tkivo obsevanih prejemnikov. Avtorji menijo, da so celice rumenjak vrečko fenotipa CD34 + c-kit + glede na njihove sposobnosti, da ponovno naseliti opustošenih krvotvornih organov, ne samo, da se ne razlikujejo od tistih v AGM-regije, ampak tudi bolj učinkovito obnoviti hematopoeze, kot v hranilni mešiček jih vsebuje skoraj 37-krat več .

Treba je opozoriti, da pri poskusih, so hematopoetske celice hranilni mešiček z antigeni označevalne GSK (c-kit + in / ali celice CD34 + in CD38 +), ki so bili uvedeni neposredno v jetrih ali trebušno veno potomstvo samic miši, ki so prejemali injekcije busulfan do 18. Dan brejosti. V teh mladičih že sami mielopoeze močno depresivni zaradi odprave hemopoetičnih matičnih celic, busulfan povzroča. Po presaditvi, HSCs o hranilni mešiček za mesece in v periferni krvi prejemnikov označene krvne celice, ki vsebujejo donatorjev označevalec - glitserofasfatdegidrogenazu. To je bilo, da je hranilni mešiček GSK zmanjša vsebnost limfoidnih celic, mieloidnih in eritroidne linije iz krvi, timusa, vranice in kostnega mozga, kjer je stopnja himerizma višja pri intrahepatičnih, ne intravenskimi hranilni mešiček celic. Avtorji kažejo, da HSCs o hranilni mešiček zarodkov zgodnjih fazah razvoja (do 10 dni), za uspešno poravnavo obtočil organov odraslih prejemniki, ki potrebujejo predhodno sodelovanje z krvotvornih mikrookoljem jeter. Možno je, da je v embriogeneze edinstven fazi razvoja, ko se celice hranilni mešiček, selijo predvsem v jetrih, nato pa pridobiti možnost, da kolonizirajo Stroma tvorijo organe prejemnikov odraslih.

V zvezi s tem je treba opozoriti, da je himerizma celic imunskega sistema pogosto opazimo po presaditvi celic kostnega mozga v obsevanih prejemnikov spolno zrelih - v krvnih celicah darovalca zadnjih fenotipov v dovolj velikih količinah najdemo med B- in T-limfocitov in granulocitov prejemnika, ki traja vsaj 6 mesecev.

Morfološke metode hemopoetičnih celic na sesalcih prvič zaznali na 7. Dan razvoja zarodka in predstavlja hemopoetičnih otoke znotraj plovila v hranilni mešiček. Vendar pa je naravno hematopoetska razlikovanje v hranilni mešiček omejena primarni eritrocitov ohranjanje jedro in sintetiziranje fetalnega hemoglobina. Vendar, tradicionalno so mislili, da je hranilni mešiček edini vir HSC selijo na organe v razvoju zarodka krvi oblikovanje in zagotoviti dokončno hematopoeze pri odraslih živalih, saj je videz HSC v telesu zarodka je zaprtje žilnega sistema vrečko zarodkov in rumenjaka. V podporo tega vidika, glede na podatke, ki v in vitro kloniranje celic hranilni mešiček povzročajo granulocitov in makrofagov, A in vivo - vranice kolonij. Nato med transplantacijo poskusi je bilo ugotovljeno, da so hematopoetični celice hranilni mešiček, ki v rumenjak so sac sposobni razlikovati samo v primarnih rdečih krvnih celic v mikro jeter novorojenih in odraslih SCID-miši Devastirana timus ali stromalni podajalnik pridobi sposobnost repopulate hemopoetičnih organov z obnovo vseh hematopoetske linije tudi pri odraslih živalih-prejemnikov. Načeloma je to lahko jih pripišemo kategoriji prave GSK - kot delovanje celic in v poporodnem obdobju. Predpostavlja se, da je vir HSCs za dokončno hematopoeze pri sesalcih, pa je hranilni mešiček, skupaj z AGM regiji še vedno ni jasno, za njihov prispevek k razvoju krvotvornih sistema. Ne razumem biološko pomen in obstoj v začetku embriogeneze sesalcev, dve krvotvornih organov s podobnimi funkcijami.

Iskanje odgovorov na ta vprašanja se nadaljuje. In vivo ni dokazala prisotnost hranilni mešiček zarodkov 8-8,5-dnevna celica limfopoietično pri zmanjševanju subletalno obsevane SCID-miši s hudim pomanjkanjem limfocitov T in B. Hematoopoetske celice rumenega jajčeca so injicirali intraperitonealno in neposredno v tkivo vranice in jeter. Po 16 tednih prejemniki označene TCR / CD34 \ CD4 + in CD8 + T-limfocitov in B-220 celice + IgM + B označi antrhgenami darovalca MHC. V telesu niso našli avtorjev 8-8,5-dnevnih zarodkov matičnih celic, ki so sposobni takšne obnove imunskega sistema.

Hranilni mešiček hematopoetske celice imajo visoko proliferativne potencial in so sposobni dolgoročno self-razmnoževanje in vitro. Nekateri avtorji so ugotovili te celice kot podlaga za dolgoročno zdravstveno varnost (približno 7 mesecev) generacijo eritroidnih matičnih celic, ki se razlikujejo od prednikov kostnega mozga eritroidnih skladu pasažo daljše trajanje, velike kolonije, povečana občutljivost na rastnih faktorjev in daljši orožja. Poleg tega je v skladu z ustreznimi kultiviranja hranilni mešiček celic in vitro pogojih tvorjena in predhodnih celic iz serije limfoidnega.

Ti podatki kažejo splošno vir hranilni mešiček GSK, kjer manj od črpanih in imajo zato velik proliferativni potencial kot izvornih celic kostnega mozga. Vendar pa kljub temu, da je rumenjak vrečka vsebuje pluripotentnih hemopoetičnih matičnih celic, dolgoročno podpirajo različne linije krvotvornih diferenciacije in vitro, edino merilo za uporabnost GCW je njihova sposobnost, da ponovno naseliti daljša hemopoetičnih organe prejemnika, hemopoetičnih celice, ki so genetsko pomanjkljiva ali poškodovana. Zato je ključno vprašanje, ali pluripotentnih hematopoetske celice hranilni mešiček selijo in naseljujejo hemopoetičnih organov in tselesoorbrazno treba popraviti znano delo, ki je pokazala svojo sposobnost, da ponovno naseliti v organe spolno zrelih živali, krvi tvori z oblikovanjem glavnih hematopoetske linij. V zarodkov ptic v 70-ih letih je bilo ugotovljeno intraembrionalnye virov dokončna HSC, ki je bil že imenovani pod vprašaj uveljavljene predstave o izvoru adneksov GSK, vključno s predstavniki drugih razredov vretenčarjev. V zadnjih nekaj letih je bilo publikacije o prisotnosti sesalcev in ljudje s podobnimi intraembrionalnyh strani, ki vsebujejo GSK.

Še enkrat smo ugotovili, da je temeljno znanje na tem področju izredno pomembno za presaditev praktično celic, saj ne samo pomaga določiti prednostni vir za varovanje zdravja, ampak tudi ugotoviti posebnosti interakcije primarnih hematopoetske celice iz gensko tujih organizmov. Znano je, da uporaba človeških hematopoetskih izvornih celic fetalnih ovce jeter organogeneze zarodka na stopnji vodi k proizvodnji kimernih živali, krvi in kostnega mozga so stabilno določi od 3 do 5% hematopoetičnih celicah človeka. V tem primeru, človekove HSCs ne bodo spremenile kariotip, hkrati pa ohranja visoko stopnjo širjenja in sposobnost razlikovanja. Poleg tega presajenih ksenogenska HSC ni v nasprotju z imunskim sistemom in fagocitne celice gostiteljskega organizma in se ne pretvori v tumorskih celicah, ki so bile podlaga intenzivnega razvoja metod za intrauterino korekcijo dedne genetske bolezni z uporabo ekonomsko-socialnimi sveti ali HSCs transfektirane s pomanjkanjem geni.

Toda na kateri stopnji embriogeneze je primerneje opraviti takšen popravek? Celice za prvič, določene za hematopoeze pri sesalcih se pojavijo takoj po vsaditvi (dan 6 od nosečnosti), ko so morfološke značilnosti krvotvornih diferenciacije in domnevnih obtočil organov še niso na voljo. Na tej stopnji, lahko miš zarodek celice razpršeni repopulate hemopoetičnih organov obsevana prejemnike, da se tvori eritrocitov in limfocite, ki odstopa od gostiteljskih celic ali hemoglobina tipom oziroma glitserofosfatizomerazy in dodatno kromosomsko oznako (tb) donatorja celic. Pri sesalcih, kot ptice, skupaj z hranilni mešiček do zaprtja celotne ožilni neposredno v telo zarodka v para-aortno splanhnoplevre prikazani hemopoetičnih celic. Od AGM dodeljenega območja hematopoetičnih celic AA4.1 + fenotip, prepoznani kot multipotentne hematopoetičnih celic, ki so T in B limfocite, granulocite, megakariocitov in makrofagov. Fenotipsko ti multipotentne predniške celice so zelo blizu HSCs kostnega mozga pri odraslih živalih (CD34 + c-kit +). Število večpotentnih AA4.1 + celic med vsemi celicami AGM-regije je majhno - predstavljajo največ 1/12 njenega dela.

V človeškem zarodku je bila ugotovljena tudi homologna AGM-regija živali, ki je vsebovala intraembrionsko regijo, ki vsebuje HSC. Poleg tega pri ljudeh več kot 80% multipotentnih celic z visokim proliferativnim potencialom vsebuje telo zarodka, čeprav so takšne celice prisotne v rumeni vrečki. Podrobna analiza njihove lokalizacije je pokazala, da je na stotine takih celic sestavljenih v kompaktne skupine, ki se nahajajo v neposredni bližini endotela ventralnega zidu hrbtne aorte. Fenotipsko so CD34CD45 + Lin celice. Nasprotno, v jajčni vrečki, pa tudi v drugih hematopoetskih organih zarodka (jeter, kostni mozeg), so takšne celice posamezne.

Zato človeških embrionalnih AGM-regija vsebuje grozdov hematopoetičnih celic, ki so tesno povezane z ventralno hrbtna aorta endotelija. Ta stik lahko zasledimo in imunokemijska ravni - in grozdov hematopoetičnih celic in endotelnih celic, ki izražajo vaskularni endotelni rastni faktor, Flt-3 ligand in njihove receptorje flk-1 in STK-1, kot tudi levkemija izvornih celic transkripcijski faktor. Mezenhimske derivate AGM-območje predstavljeno gosto tyazhem zaokroženo celice, ki se nahajajo vzdolž hrbtne aorto in izražajo tenascin C - glikoproteina osnovno snov aktivno sodeluje v procesih celične interakcije med celicami in migracije.

Multipotentne matične celice AGM-okraj po presaditvi hitro obnoviti hematopoeze pri odraslih miših in izpostavljeni dlje časa (do 8 mesecev) zagotavlja učinkovito hematopoeze. Avtorji v rumeničnem vreču celic s takšnimi lastnostmi niso razkrili. Rezultati te študije potrjujejo drugo delo, ki je pokazala, da je v zgodnjih fazah razvoja zarodkov (10,5 dni) AGM regiji edini vir celic, ki ustrezajo opredelitvi GCW, mieloidnih in limfni povratni hematopoeze pri odraslih obsevan prejemnike.

Od AGM dodeljena površina stromalni začetno AGM-S3, ki podpirajo tvorbo celic v kulturi CFU-GM, dodeljenih prednikov, BFU-E, CFU-E in CFU mešanega tipa. Vsebina najpozneje pri kultiviramo na hranilna spodnja AGM-S3 celična linija povečuje od 10 do 80-krat. Zato v mikro AGM-regijo, prisotno stromalnih celic, učinkovito podpirajo kri, zato je AGM-površina lahko služi tudi embrionalne-krvotvornih organov - dokončno vir HSC, da se, GSK tvori hematopoetskih tkivo odrasle živali.

Podrobno immunofenotipirovanie celični Sestavek AGM-regija pokazala, da bivajo ne le multipotentne hemopoetičnih celic, ampak tudi celice zavzema za razlikovanje mieloično in limfnih (limfocitov T in B). Vendar, če je molekulska analiza posameznega CD34 + c-kit + celicami od delničarjev območja z uporabo polimerazne verižne reakcije pokazala aktiviranjem samo beta-globin in mieloperoksidaze vendar limfoidne genov, ki kodirajo sintezo CD34, Thy-1 in 15. Delno aktiviranje rodovno specifične gene tipične za zgodnje ontogenetske stopnje nastanka HSC in progenitornih celic. Glede na to, da se je število kommiti- Rowan izvornih celic v AGM-območje 10-dnevnega zarodek 2-3 velikostnih razredov nižje kot v jetrih, je mogoče trditi, da je na dan 10. Zarodka hematopoeze v skupščini se šele začenja, ker je v glavnem v tem obdobju so že razvite hematopoetske linije.

Dejansko je v nasprotju s prejšnjimi (9-11 dni) hematopoetičnih izvornih celic hranilni mešiček ter področje skupščini, ki doseljevanja hematopoetskih mikrookolje novorojenčka, vendar ne pri odraslem, hematopoetskih zarodnih celic ne fetalnih jetrih 12-17 dni niso potrebni zgodnji poporodni mikrookolje in hematopoetske organi zasedajo žival odraslih ni slabše kot novorojenčka. HSCs po transplantaciji fetalnih jetrih odraslega hematopoeze v obsevanih miših prejemnice je poliklonsko v naravi. Poleg tega, z uporabo označenih kolonije je pokazala, da je bilo delovanje uveljavljenih klonov popolnoma uboga klonske nasledstvo, odkrita v odraslih kostnem mozgu. Zato, GSK jetra plodu označena toliko nežne pogoje brez prestimulyatsii eksogenih citokinov, že imajo osnovne lastnosti odraslih HSCs niso potrebne v začetku postembrionalnem mikrookoljem v državo globokega počitka po presaditvi in mobilizirati klonoobrazovanie zaporedoma v skladu z vzorcem klonsko nasledstva.

Očitno bi se morali bolj podrobno osredotočiti na pojav klonskega nasledstva. Eritropoeza nosi matične hemopoetske celice z visokim proliferativnim potencialom in sposobnostjo razlikovanja v vseh linijah predhodnih krvnih celic prekurzorjev. Med normalnim intenzivnosti hematopoeze večino hematopoetskih zarodnih celic, v mirujočem stanju in se uporabi za proliferacijo in diferenciacijo zaporedno tvorjenje zaporednih klonov. Ta proces se imenuje klonalno dedovanje. Eksperimentalne dokaze o klonskem zaporedju v hematopoetskem sistemu so bili pridobljeni v študijah z GSK, označenimi z retrovirusnim prenosom genov. Pri odraslih živalih hematopoezo vzdržujejo številni sočasno delujoči hemopoetski kloni, pridobljeni iz GSK. Na podlagi pojava klonske dedukcije je bil razvit repopulacijski pristop k identifikaciji GCS. V skladu s tem načelom, razlikovati dolgoročno HSCs (dolgoročna krvotvornih matičnih celic, LT-HSC), je sposoben obnoviti hematopoetske sistem vseživljenjskega učenja, in kratkoročno HSC, za opravljanje te funkcije za omejeno časovno obdobje.

Če upoštevamo hemopoetičnih matičnih celic v smislu repopulyatsionnogo pristop, značilen za hematopoetske fetalnih jetrnih celic je njihova sposobnost, da ustvarite kolonijo, ki je po velikosti je precej višje od tistih, ki s povečanjem GSK popkovnične krvi ali kostnega mozga, in to velja za vse vrste družin. To dejstvo kaže večjo povečanje možnosti hematopoetskih fetalnih jetrnih celic. Edinstvena značilnost hematopoetskih zarodnih celic fetalnih jeter - krajši v primerjavi z drugimi viri celični cikel, ki je pomembna s stališča učinkovitosti naselitve hematopoeze in presajanju. Analiza celične sestavka hematopoetične suspenzije, dobljene iz virov zrelega organizma, kaže, da je na vseh stopnjah zorenjem celic z jedri prednostno zastopnika terminalno diferencirane celice, število in fenotip katerih odvisna od starosti darovalca hematopoetskih ontogenetskem tkiva. Zlasti suspenzijo mononuklearnih kostnega mozga in popkovnične krvi celic za več kot 50% sestavljeno iz zrelih limfoidnega izvora celice, ker je manj kot 10% limfocitov najdemo v fetalnih jetrih hemopoietic tkiva. Poleg tega mieloidne linije celic v fetalnih jetrih in eritroidnih ploda prednostno predstavljeni dostavo, v popkovnične krvi in kostnega mozga granulocitov-makrofagov prevlada elementov.

Pomembno je, da embrionalna jetra vsebuje celoten nabor prvih predhodnikov hemopoeze. Slednje vključujejo eritroidne, granulopoetske, megakarifoetične in večlinarne celice, ki tvorijo kolonije. Njihovi bolj primitivni predniki - LTC-IC - lahko proliferirajo in se diferencirajo in vitro za 5 ali več tednov, pa tudi za vzdrževanje funkcionalno aktivnost po prijetje presadka v telesu prejemnika v alogenskim in celo ksenogenska presajanje v imunodeficitnih živalih.

Biološka prevlada izvedljivosti fetalnih eritroidnih jetrnih celic (do 90% skupnih hematopoetičnih celic) zaradi potrebe po zagotavljanju eritrocitov masa hitro povečuje volumen krvi v razvoju zarodka. Pri plodu eritropoeze jeter jedrske eritroidnih predhodniki zastopa različne stopnje zrelosti vsebuje fetalnega hemoglobina (a2u7), ki je posledica večjo afiniteto za kisik zagotavlja učinkovito absorpcijo slednje iz materine krvi. Okrepitev eritropoeze v fetalnih jetrih je povezan z lokalnim povečanjem sintezo eritropoetina (EPO). Omeniti je treba, da izvajanje hemopoetičnih potenciala hematopoetičnih fetalnih jetrnih celic zadosti prisotnost samo z eritropoetinom, ker je predan rodu do HSCs eritropoezo kostnega mozga in popkovnične krvi zahteva kombinacijo citokinov in rastnih faktorjev, ki so sestavljeni iz EPO, SCF, GM-CSF in IL-3. V tej zgodnji hematopoetskih zarodnih celic, izoliranih iz fetalnih jetrih brez receptorje za EPO, se ne odzivajo na eksogenega eritropoetina. Za indukcijo eritropoeze v suspenziji fetalnih jeter mononuklearnih celic zahteva prisotnost naprednejše eritropoetinchuvstvitelnyh celic s fenotipom CD34 + CD38 +, ki izražajo receptor EPO.

V literaturi se še vedno ni oblikovala soglasje o vzpostavitvi hematopoeze v embrionalnega obdobja. Ni dokazala obstoja in funkcionalni pomen izvensodnih in intraembrionalnyh virov hematopoietičnih matičnih celic. Vendar ni dvoma, da je človeška jetra v embriogeneze osrednji organ hematopoeze in za 6-12 tednov nosečnosti je primarni vir hemopoetičnih matičnih celic, ki zapolnijo vranica, timus in kostni mozeg, NDR doseči s tem povezane funkcije v pred in po rojstvu obdobja razvoj.

Opozoriti je treba še, da je embrionalna jetra v primerjavi z drugimi viri označena z najvišjo vsebnostjo HSC. Približno 30% celic CD344 embrionalnih jeter ima fenotip CD38. Hkrati je število limfoidnih progenitornih celic (CD45 +) v zgodnjih fazah hematopoeze v jetrih največ 4%. Ugotovljeno je bilo, da je kot plod od 7 do 17 tednih nosečnosti, se je število B limfocitov povečuje postopoma z mesečno "korak", je 1,1%, medtem ko je stopnja GSK trajno zmanjša.

Funkcionalna aktivnost hematopoetskih izvornih celic je odvisna tudi od obdobja zarodnega razvoja njihovega izvora. Preiskave jetrnih celic, ki tvorijo kolonije aktivnosti človeških zarodkov 6-8 minut in 9-12 minut tednih nosečnosti pri kultiviramo v poltrdnega mediju v prisotnosti SCF, GM-CSF, IL-3, IL-6 in EPO je pokazala, da je skupno število kolonij v 1 , 5-krat višja pri setvi HSV embrionalne jeter že zgodaj v razvoju. Hkrati se je število jetrnih matičnih celic mielopoeze kot CFU-GEMM, po 6-8 tednih embriogeneze je več kot trikrat več pri 9-12 tednih nosečnosti. Na splošno je bilo jetra hematopoetska tvorbe kolonij aktivnost prvem trimesečju celic nosečnosti embrionalnih znatno višja od fetalnih jetrnih celic drugega trimesečja nosečnosti.

Zgornji podatki kažejo, da je v fetalnih jetrih v začetku embriogenezo označen s tem ne samo visoko vsebnost zgodnjih hematopoetskih matičnih celic, vendar hematopoetske celice označena s široko paleto diferenciacije v različnih celičnih linijah. Te značilnosti funkcionalnega delovanja matičnih hematopoetske fetalnih jetrnih celic, so lahko nekatere klinično pomembna, saj omogočajo njihove kakovostne značilnosti pričakovati terapevtski učinek, ko je izrazil presaditev tudi majhno količino celic, pridobljenih v zgodnjih fazah nosečnosti.

Kljub temu je problem števila hematopoetskih matičnih celic, potrebnih za učinkovito presaditev, odprt in ustrezen. Poskuša se rešiti z uporabo velikega potenciala samoreprodukcije hematopoetskih celic embrionalne jeter in vitro s stimulacijo s citokini in rastnimi faktorji. S stalno perfuzijo v bioreaktorju zgodnjega GSS embrionalne jeter je po 2-3 dneh na izhodu mogoče pridobiti število matičnih hemopoetskih celic 15 krat večjo od njihove bazalne ravni. Za primerjavo je treba opozoriti, da je za doseganje 20-kratnega povečanja pridelka krvnih ploščic HSC v enakih pogojih potrebno vsaj dva tedna.

Tako se embrionalna jetra razlikuje od drugih virov hematopoetskih matičnih celic z višjo vsebnostjo obeh storjenih in zgodnjih hematopoetskih progenitornih celic. V kulturi z fetalnih jetrnih celic z rastnimi faktorji pri fenotipa celice CD34 + CD45Ra1 CD71l0W obliki 30-krat več kolonij od podobnih kabel krvnih celic, in 90-krat več, kot v kostnem mozgu HSCs. Najbolj izrazito v teh virov razlike v vsebnosti zgodnjih hematopoietičnih matičnih celic, ki so mešane kolonije - število CFU-GEMM v fetalnih jetrih presega tisto iz popkovnične krvi in kostnega mozga, oziroma 60 in 250-krat.

Pomembno je dejstvo, da je do 18. Tednu razvoja zarodka (v začetku leta hematopoeze v kostnem mozgu) pri izvajanju funkcije hemopoietic vključuje več kot 60% jetrnih celic. Ker je pred 13. Tednom razvoja ploda pri ljudeh so odsotne priželjc in timocitov oziroma, presaditev hematopoetskih fetalnih jetrnih celicah 6-12 tednih nosečnosti bistveno zmanjša tveganje za reakcije "presadka proti gostitelju" in ne zahteva izbor za histocompatible darovalca, saj omogoča relativno enostavno doseči hemopoetski kimerizem.