Hepatitis C PCR

HCV v materialu običajno ni prisoten.

Za razliko od seroloških metod diagnosticiranja virusnega hepatitisa C, ki odkrivajo protitelesa proti HCV, PCR omogoča neposredno odkrivanje prisotnosti HCV RNA in kvantificiranje njene koncentracije v testnem materialu. Test ima vrstno specifičnost in visoko občutljivost: deset molekul HCV RNA v testnem materialu zadostuje za njeno odkrivanje. Odkrivanje protiteles proti HCV le potrdi dejstvo okužbe bolnika, vendar ne omogoča presoje aktivnosti infekcijskega procesa (replikacije virusa) in prognoze bolezni. Poleg tega se protitelesa proti HCV odkrijejo tako v krvi bolnikov z akutnim in kroničnim hepatitisom kot tudi pri tistih bolnikih, ki so bili bolni in okrevali, pogosto pa se protitelesa v krvi pojavijo šele nekaj mesecev po pojavu klinične slike bolezni, kar otežuje diagnozo. Odkrivanje HCV v krvi s PCR je bolj informativna diagnostična metoda. Odkrivanje HCV RNA s PCR kaže na viremijo, omogoča presojo replikacije virusa v telesu in služi kot eno od meril za učinkovitost protivirusnega zdravljenja. Odkrivanje HCV RNA s PCR v zgodnjih fazah virusne okužbe ob popolni odsotnosti kakršnih koli seroloških markerjev lahko služi kot najzgodnejši dokaz okužbe. Vendar pa izolirana detekcija HCV RNA ob popolni odsotnosti drugih seroloških markerjev ne more popolnoma izključiti lažno pozitivnega rezultata PCR. V takih primerih je potrebna celovita ocena kliničnih, biokemijskih in morfoloških študij s ponavljajočo se večkratno potrditvijo prisotnosti okužbe s PCR.

Uporaba metode PCR pri bolnikih s kroničnim virusnim hepatitisom C je zelo pomembna, saj pri večini od njih ni korelacije med prisotnostjo virusne replikacije in aktivnostjo jetrnih encimov. V takih primerih nam le PCR omogoča presojo prisotnosti virusne replikacije, zlasti če je končni rezultat izražen kvantitativno. V večini primerov bolezni izginotje HCV RNA iz krvnega seruma nastopi pozneje kot normalizacija jetrnih encimov, zato njihova normalizacija ne more biti podlaga za prekinitev protivirusnega zdravljenja.

Praktično pomembno je, da se za odkrivanje HCV RNA z metodo PCR pregledajo ne le krvni serum, temveč tudi limfociti in vzorci hepatobiopsije. Viruse je mogoče v jetrnem tkivu odkriti 2-3-krat pogosteje kot v krvnem serumu. Pri ocenjevanju rezultatov testa krvnega seruma za HCV RNA je treba upoštevati, da je viremija lahko nihajne narave (kot tudi spremembe v aktivnosti encimov). Zato se po pozitivnih rezultatih testa PCR lahko dobi negativen rezultat in obratno. V takih primerih je bolje pregledati vzorce hepatobiopsije, da se razrešijo morebitni dvomi.

Detekcija HCV RNA v materialu z uporabo PCR se uporablja za naslednje namene:

• reševanje vprašljivih rezultatov seroloških testov;
• razlikovanje virusnega hepatitisa C od drugih oblik hepatitisa;
• identifikacija akutne faze bolezni v primerjavi s prejšnjo okužbo ali stikom; določitev faze okužbe novorojenčkov od mater, seropozitivnih na HCV;
• spremljanje učinkovitosti protivirusnega zdravljenja.

Bolniki s sumom na virusni hepatitis C:

• donatorji;
• osebe z dejavniki tveganja;
• posamezniki s povišano aktivnostjo ALT;
• bolniki z akutnim hepatitisom

Vse zgoraj omenjene značilnosti vrednotenja rezultatov in pristopov k diagnozi HCV z uporabo PCR veljajo tudi za druge okužbe.

Metoda PCR omogoča ne le odkrivanje HCV RNA v preučevanem materialu, temveč tudi določitev njegovega genotipa. Določanje virusnega genotipa je zelo pomembno za izbiro bolnikov s kroničnim virusnim hepatitisom C za zdravljenje z interferonom alfa in ribavirinom. Laboratorijske indikacije za zdravljenje kroničnega virusnega hepatitisa C z interferonom alfa so naslednje:

• povečana aktivnost transaminaz;
• prisotnost HCV RNA v krvi;
• HCV genotipa 1;
• visoka viremija v krvi (več kot 8×10⁶ ^kopij /ml).

Trenutno je mogoče kvantitativno določiti vsebnost HCV RNA v krvnem serumu z metodo PCR, kar je zelo pomembno za spremljanje zdravljenja z interferonom alfa. Raven viremije se ocenjuje na naslednji način: pri vsebnosti HCV RNA od 102 ^do 104 ^kopij /ml - šibka; od 105 ^do 107 ^kopij /ml - povprečna, nad 108 ^kopij /ml - visoka. Z učinkovitim zdravljenjem se raven viremije zmanjša.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]