Corynebacteriae

Difterija je akutna nalezljiva bolezen, pretežno v otroštvu, kar se kaže v globokem zastrupitvi telesa z difteričnim toksinom in značilnim fibriničnim vnetjem na mestu patogena. Ime bolezni prihaja iz grške besede diphthera - koža, film, saj na mestu razmnoževanja patogena tvori gost, sivo belo folijo.

Vzročni povzročitelj davice, Corynebacterium diphtheriae, je prvič odkril leta 1883 E. Klebs v rezinah iz filma, ki ga je leta 1884 dobil v čisti kulturi F. Leffler. Leta 1888 sta E. Ru in A. Yersen odkrila sposobnost proizvodnje eksotoksina, ki ima pomembno vlogo pri etiologiji in patogenezi davice. Potrdilo E. Beringja iz leta 1892 o antitoksičnem serumu in njegova uporaba od leta 1894 za zdravljenje davice sta omogočila znatno zmanjšanje smrtnosti. Uspešen napad na to bolezen se je začel po letu 1923 v povezavi z razvojem metoda G. Rayon za pridobitev davčne toksoidne oblike.

Krivulja davice spada v rod Corynebacterium (razred Actinobacteria). Morfološko je značilen dejstvo, da so celice v obliki klopa zadebeljene na koncih (grški sogupe - mačk), tvorijo razvejanje, zlasti v starih kulturah, in vsebujejo zrnate vključke.

Rod Corynebacterium vključuje veliko število vrst, ki so razdeljene v tri skupine.

• Corynebacteria so paraziti ljudi in živali ter za njih patogeni.
• Corynebacteria, patogena za rastline.
• Nepatogene corynebacteria. Mnoge vrste Corynebacterium so normalni prebivalci kože, sluznice, nazofarinksa, oči, dihalnega trakta, sečnice in spolnih organov.

[1], [2], [3], [4], [5]

Morfologija corynebacteria

C. Difterija - ravne ali rahlo ukrivljene palice dolžine 1,0-8,0 μm in premer 0,3-0,8 μm ne tvorijo spor in kapsul. Zelo pogosto imajo otekline na enem ali obeh koncih, pogosto vsebujejo metakromatične zrnce - volute zrna (polimetafosfati), ki ob modrikastih modrih metilen modrih pridobijo modrikasto vijolično barvo. Za njihovo odkrivanje je bila predlagana posebna metoda obarvanja po Neisserju. V tem primeru so palice obarvane s slame rumene barve in volutna zrna so temno rjave barve in so običajno nameščene na polovici. Corynebacterium diphtheriae je dobro obarvan z anilinskimi barvami, Gram-pozitiven, toda v starih kulturah je pogosto razbarvan in ima negativno barvno barvo. Zanj je značilen izrazit polimorfizem, zlasti v starih kulturah in pod vplivom antibiotikov. Vsebnost G + C v DNK je približno 60 mol%.

Biokemijske lastnosti corynebacteria

Davica bacil je aerobne ali fakultativno anaerobnih temperatura optimalna za rast 35-37 ° C (15-40 ° rasti robnega C), optimalno pH 7,6-7,8. Za hranilne snovi ni zelo zahtevno, vendar raste bolje na medijih, ki vsebujejo serum ali kri. Davice selektiven za bakterije so valjani ali serumski medij Roux Leffler, rast na njih pojavijo v 8-12 urah kot konveksna, velikosti Pinhead kolonije siva barva bela ali rumenkasto kremo. Njihova površina je gladka ali rahlo granularna, na obrobju kolonije nekoliko bolj pregledna kot v sredini. Kolonije se ne združijo, kar ima za posledico kulturo, ki izgleda kot šagrinska koža. Rast juho kaže kot enotno oblak ali juho še prozoren, in je tvorjen na njegovi površini mehke folije, ki postopoma zadebelitve kruši in kosmiči usede na dno.

Značilnost bakterije davice je njihova dobra rast na krvi in medijih v serumu, ki vsebujejo koncentracije kalijevega telurita, ki zavirajo rast drugih vrst bakterij. To je posledica dejstva, da C. Diphtheriae rekonstruira kalij telurit do kovinskega telurja, ki se v mikrobnih celicah daje kolonijem značilno temno sivo ali črno barvo. Uporaba takšnih medijev povečuje odstotek setve bakterije davice.

Corynebacterium diphtheriae se fermentira glukozo, maltozo, galaktozo, da se tvori kislina brez plina, vendar ne fermentira še tsistinazu še ureaze in ne tvorijo indol (običajno) saharoza. Na podlagi tega so drugačni od tistih korineformne bakterije (diphtheroids), ki so bolj verjetno, da pride na sluznico očesa (Corynebacterium xerosus) in nazofarinksa (Corynebacterium pseiidodiphtheriticum) in drugih diphtheroids.

V naravi obstajajo tri glavne variante (biotip) difteričnega bacila: gravis, intermedini in mitis. Razlikujejo se morfološke, kulturne, biokemijske in druge lastnosti.

Razdelitev bakterije difterije v biotipe je bila izvedena ob upoštevanju oblik davice pri bolnikih, pri katerih so bile dodeljene z največjo pogostnostjo. Vrsta gravisa je pogosteje izolirana od bolnikov s hudo davico in povzroča skupinske rakete. Mitis tipa povzroča lažje in občasne primere bolezni, vrsta intermediusa pa zavzame vmesni položaj med njimi. Corynebacterium belfanti, ki je bil prej pripisan biotipi, je izoliran v ločenem, četrtem, biotipu. Njena glavna razlika od biotipov gravis in mitis je sposobnost obnovitve nitratov v nitrite. Sevi Corynebacterium belfanti imajo izrazite lepilne lastnosti, med njimi pa najdemo tako toksigenske kot nontoksigenske variante.

[6], [7], [8], [9], [10]

Antigenska struktura corynebacteria

Corynebacterium je zelo heterogena in mozaik. Vzroki za difterijo vseh treh vrst so odkrili več deset somatskih antigenov, po katerih so razdeljeni na serotipe. V Rusiji je bila sprejeta serološka klasifikacija, po kateri se razlikujejo 11 serotipov difteričnih bakterij, od katerih jih je 7 primarnih (1-7) in 4 dodatnih, redko nastalih serotipov (8-11). Šest serotipov (1, 2, 3, 4, 5, 7) so gravisovega tipa in pet (6, 8, 9, 10, 11) so vrste tipa Mitis. Pomanjkljivost metode serotifikacije je, da imajo mnogi sevi, zlasti nontoksigeni, spontano aglutinacijo ali poliagglutinabilnost.

[11]

Fagotipirovanje Corynebacterium diphtheriae

Za diferenciacijo bakterij za difterijo so predlagane različne sheme tipizacije faga. Glede na shemo MD Krylova s pomočjo množice 9 fagov (A, B, C, D, F, G, H, I, K) lahko vnesemo večino toksičnih in netoksičnih sevov gravisovega tipa. Ob upoštevanju občutljivosti na te faze ter kulturnih, antigenih lastnosti in sposobnosti sintetiziranja koričina (baktericidnih proteinov) je MD Krylov izpostavil 3 ločene skupine corynebacteria, kot je gravis (I-III). V vsakem od njih so podskupine toksigenih in nontoksigenih analogov povzročiteljev difteričnih bolezni.

Odpornost corynebacteria

Corynebacterium diphtheriae kaže veliko odpornost na nizke temperature, vendar hitro izgine pri visoki temperaturi: pri 60 ° C - 15-20 min pri vrenju - po 2-3 min. Vse razkužila (lizol, fenol, kloramin, itd.) V običajno uporabljeni koncentraciji ga uničijo v 5-10 minutah. Vendar pa povzročitelj difterije prenaša dobro sušenje in lahko dolgo ostane sposoben preživetja v posušeni sluzi, slini, v prašnih delcih. V fino razpršenem aerosolu bakterije davice ostanejo sposobne preživeti 24-48 ur.

Faktorji patogenosti corynebacteria

Patogenost Corynebacterium diphtheriae je določena s številnimi dejavniki.

Dejavniki adhezije, kolonizacije in invazije

Strukture, odgovorne za adhezijo, niso bile identificirane, vendar brez njih bakterija difterija ni mogla kolonizirati celic. Njihovo vlogo opravljajo nekateri deli celične stene patogena. Invazivne lastnosti povzročitelja so povezane s hialuronidazo, nevraminidazo in proteazo.

Toksični glikolipid, vsebovan v celični steni patogena. Predstavlja 6,6'-diester trehaloze vsebuje korinemikolovuyu kislino (S32N6403) in korinemikolinovuyu kisline (Sz2N62Oz) v ekvimolski razmerju (trehaloza 6,6'-dikorinemikolat). Glikolipid ima uničujoči učinek na celicah tkiva na mestu razmnoževanja patogena.

Exotoksin, ki določa patogenost patogena in naravo patogeneze bolezni. Nevtoksigenske variante C. Diphtheriae ne povzročajo difterije.

Eksotoksin se sintetizira kot neaktivnega prekurzorja - enojno polipeptidno verigo z Mm 61 kD. Njegova aktivacija se izvede lastno bakterijske proteazo, ki reže v dveh polipeptid z disulfidnimi vezmi med peptida A (molekulska 21 kDa) in B (molekulska 39 kDa) povezan. Akceptor peptid opravlja funkcijo - prepozna receptor veže na njej in ustvari intramembranous kanal, skozi katerega vstopi v celico in peptid A prodaja biološko aktivnost toksina. Peptid je encim ADP riboziltransferazu ki določa adenozindifosfata prenos riboze iz NAD na enem od aminokislinskega ostanka (histidin) proteinski razteznostni koeficient EF-2. Kot posledica spremembe EF-2 izgubi svojo aktivnost, kar vodi do zaviranja sinteze proteinov na ribosoma koraku translokacije. Toksin se sintetizira samo tiste C. Diphtheriae, ki so kot kromosomski geni moderiranjem pretvorbo prophage. Plazmidi, ki kodira sintezo toksin monocistronic, da sestoji iz 1,9 tisoč baznih parov in ima toxP promotor in 3 mesta :. ToxS, toxA in toxB. Plot toxS kodira 25 aminokislinskih ostankov signalni peptid (zagotavlja dobitek toksina skozi membrano v periplazmatski prostor bakterijske celice), toxA - 193 aminokislinskih ostankov peptid, in toxB - 342 aminokislinskih ostankov v peptidni toksina. Izguba celic prophage ali mutacij v TOX-operon da mobilni malotoksigennoy. Nasprotno, lysogenization nontoxigenic C. Diphtheriae preoblikovalni fag iz njih naredi strupenih bakterij. To je dokazano nedvoumno: toksičnost za davičnih bakterij, odvisno od njihove lysogenization pretvarja TOX-korinefagami. Korinefagi vključena v kromosomu korineformne bakterije z uporabo mehanizma rekombinacijsko mesto specifični in difteričnim bakterijskih sevov lahko vsebuje v svojem kromosomu na 2 straneh rekombinacijo (attB) in korinefagi integrirana v vsaki od njih z enako frekvenco.

Genetska analiza niza nontoxigenic lističev difteričnim bakterij izvedemo z uporabo označenih DNA sond, ki nosijo fragmente tox-operon korinefaga pokazali, da so njihovi kromosomov DNA sekvence, homologne tox-operon korinefaga vendar pa bodisi kodiranje neaktivne polipeptidov ali so v " tiho "pogoj, tj. E. Aktivna. V zvezi s tem je zelo pomembno epidemiološko vprašanje je, ali nontoxigenic davice bakterije spremenijo v toksigene vivo (v telesu), tako kot to počne in vitro? Možnost take pretvorbe nontoxigenic kultur v corynebacteria toksigene uporabo konverzijo faga je pokazalo pri poskusih na morskih prašičkih, piščančjih zarodkov in belih miši. Vendar, ali se to zgodi v času naravnega procesa epidemije (in če je, kako pogosto), pa ni bilo mogoče ugotoviti.

Zaradi dejstva, da je difterijski toksin v telesu bolnikov selektivni in specifični učinek na nekaterih sistemov (predvsem vpliva sympatho-nadledvične sistem, srce, žile in perifernih živcev), potem seveda, ne samo inhibira biosintezo proteina v celicah, temveč tudi povzroča druge motnje v presnovi.

Za odkrivanje toksičnosti bakterij davice lahko uporabite naslednje metode:

• Biološki testi na živalih. Inkrajalna okužba morskih prašičkov s filtratom bujonske kulture bakterij davice povzroča nekrozo na mestu uporabe. Ena minimalna letalna doza toksina (20-30 ng) ubije morski prašek, ki tehta 250 g s subkutano injekcijo 4-5. Najbolj značilna manifestacija delovanja toksina je porast nadledvičnih žlez, povečana in močno hiperemična.
• Okužba piščančjih zarodkov. Dipterijski toksin povzroči njihovo smrt.
• Okužba celičnih kultur. Difterijski toksin povzroči izrazit citopatski učinek.
• Metoda trdnega faznega vezanega imunosorbentnega testa z uporabo antitoksinov, označenih s peroksidazo.
• Uporaba DNA sonde za neposredno odkrivanje toksoperona v kromosomu bakterije difterije.

Vendar je najbolj preprost in običajen način določanja toksičnosti bakterije davica serološka metoda padavin v gelu. Bistvo je, kot sledi. Trak sterilne filtrirni papir z merami 1,5 x 8 cm navlažen razstrupljanju davice seruma, ki vsebuje 500 AE 1 ml, in apliciramo na površino medija v petrijevko. Posodo posušimo v termostatu 15-20 minut. Testne kulture se inokulirajo z plaki na obeh straneh papirja. Na eni skodelici se posejamo več sevov, od katerih je ena strupena, ki služi kot nadzor. Skodelice z pridelke smo inkubirali pri 37 ° C, rezultati omogočajo 24-48 ur. Zaradi Interdiffusion gel antitoksin in toksin na mestu njihove interakcije tvori bistro precipitacijsko linijo, ki se združuje s toksigenske precipitacijsko kontrolno linijo. Trakove nespecifično padavin (so oblikovani, če serumski antitoksin prisoten poleg majhne količine druga antimikrobiološka protiteles) pojavijo kasneje, so blage in nikoli združiti s trakom kontrolnega padavine seva.

Postinfektivna imuniteta

Močni, vztrajni, praktično vseživljenjski, ponavljajoči se primeri bolezni so redko opazovani - pri 5-7% bolnikov, ki so se opomogli. Imuniteta je pretežno antitoksična, protimikrobna protitelesa so manj pomembna.

Za oceno stopnje imunske imunotropnosti je bil Shikov test že prej široko uporabljen. V ta namen smo otrokom v prostornini 0,2 ml intradermalno injicirali 1/40 dim toksina za morskega prašička. Če ne antitoxic imuniteta 24-48 ur na mestu injiciranja pojavi rdečica in otekanje več kot 1 cm v premeru. Takšna reakcija pozitivna Schick označuje popolno odsotnost antitoksina oziroma da je vsebnost je manjša kot 0,001 AU / ml krvi. Negativno reakcijo zdravila Chick opazimo, če je vsebnost antitoxina v krvi višja od 0,03 AE / ml. Če je vsebnost antitoxina pod 0,03 AE / ml, vendar nad 0,001 AE / ml, je reakcija Shick lahko pozitivna ali včasih negativna. Poleg tega ima toksin izrazito alergeno lastnost. Zato je za določanje ravni imunosti antidiphtheria (kvantitativni vsebnost antitoksin) boljša uporaba TPHA diagnosticum z eritrocitov občutljivi na toksoid davice.

Epidemiologija davice

Edini vir okužbe je oseba - bolan, okrevalen ali zdrav prevoznik. Okužba se pojavi zaradi kapljic v zraku, klimatsko prahu, ki ga, kot tudi s pomočjo različnih predmetov, ki so v uporabi pri bolnikih ali zdravih bakterij prevoznikov: kuhinjski pripomočki, knjige, posteljnino, igrače, itd V primeru okužbe s hrano (mleko, smetana, itd .... Itd.), se je mogoče okužiti z živalsko potjo. Najbolj masivni izločanje patogena se pojavlja v akutni obliki bolezni. Vendar so najbolj epidemiološko pomembni ljudje z izbrisano, netipično obliko bolezni, ker pogosto niso hospitalizirani in niso takoj vidni. Bolnik z davico je nalezljiv med celotnim obdobjem bolezni in delom obdobja okrevanja. Povprečno obdobje bakterijskega prenosa pri okrevanju je od 2 do 7 tednov, lahko pa traja tudi do 3 mesece.

Posebno vlogo pri epidemiologiji davice igrajo zdrave bakterijske nosilci. V pogojih občasne morbidnosti so glavni distributerji davice, ki prispevajo k ohranjanju patogena v naravi. Povprečno trajanje prevoza strupenih sevov je nekoliko manj (približno 2 meseca) kot netoksigeni sevi (približno 2-3 mesece).

Razlog za oblikovanje zdravega nosilca toksigenih in nontoksigenih bakterij za difterijo ni povsem razkrit, saj celo visok nivo antitoxične imunosti ne zagotavlja vedno popolnega sproščanja organizma iz patogena. Morda je pomembna stopnja protimikrobne imunosti. Prevoz toksigenih sevov bakterij davice je primarnega epidemiološkega pomena.

[12], [13], [14], [15], [16], [17], [18], [19],

Simptomi davice

Ljudje katere koli starosti so dovzetni za davico. Sredstvo lahko prodrejo v človeško telo skozi sluznico različnih organih ali skozi poškodovano kožo. Glede na proces lokalizacije se razlikujejo davice grlo, nos, grlo, ušesa, oči, genitalije in koža. Mešane oblike so možne, na primer davico ust in kože, itd inkubacijska doba - .. 2-10 dni. Če klinično pomembna oblika davice v kraju lokalizacijo patogena razvije značilno fibrinous vnetje sluznice. Strup proizvaja patogena, najprej prizadene epitelijskih celic, nato pa obdajajo krvne žile, kar povečuje njihovo prepustnost. Odpadni eksudat vsebuje fibrinogen, koagulacije ki ima za posledico tvorbo o sivkasta-bel napadih Filmy površino sluznice, ki dobro privarjena na predmet tkiva in ga sneli iz povzroči krvavitev. Posledica uničenja krvnih žil lahko razvoj lokalnega edema. Posebej nevaren je davica žrela, ker lahko povzroči davice križa zaradi edem grla sluznice in glasilk, ki se prej umre zaradi zadušitve 50-60% bolnikov z difteričnim otrok. Toksin davice, ki vstopajo v kri, kar povzroči globoko splošno toksičnost. To vpliva predvsem na kardiovaskularni, simpatična-adrenalne sistema in perifernih živcev. Tako so simptomi davici tvorjen iz kombinacije lokalnih simptomov, odvisno od lokacije dvoriščna vrata, ter splošne simptome, ki jih zastruplja toksin in se kažejo v obliki adynamia, letargija, bledica kože, znižuje krvni tlak, miokarditis, paralizo in druge bolezni perifernega živčevja živci. Davica pri cepljenih otrocih, in če je, tokovi so običajno blagi in brez zapletov. Smrtnost pred nanosom serotherapy in antibiotiki znašal 50-60%, zdaj - 3-6%.

Laboratorijska diagnostika davice

Edina metoda mikrobiološke diagnoze davice je bakteriološka, z obveznim testiranjem izolirane korteobakterije za toksigenicnost. Bakteriološke študije o davici se izvajajo v treh primerih:

• za diagnozo davice pri otrocih in odraslih z akutnimi vnetnimi procesi na področju grla, nosu, nazofarinksa;
• o epidemioloških indikacijah oseb, ki so bile v stiku z virom povzročitelja davice;
• osebe, ki so na novo vstopile v sirotišnice, dnevne drevesnice, dijaške domove in druge posebne ustanove za otroke in odrasle, da bi med njimi identificirali morebitne nosilce bakterije diphtheria bacillus.

Material za študijo so sluz iz grla in nosu, film z tonzile ali drugimi sluznicami, ki so zanimivi vhoda vrata patogena. Pridelki proizvajajo telluritovye v serumu ali krvi in medija istočasno zloženemu serumski medij Roux (prepognjen konjskega seruma) ali Lefflerjem (3 masne dele govejega seruma in 1 del brozge sladkorja), pri kateri se pojavi rasti že po 8-12 urah. Rekuperirani Kulturo smo označene z corynebacteria nabor morfoloških, kulturnih in biokemičnih lastnosti, če je mogoče, uporabite metode sivih in fagnih tipk. V vseh primerih je treba preveriti toksičnost z enim od zgornjih metod. Morfološke značilnosti Corynebacterium boljše študija z uporabo treh metod priprave obarvanje stikom: Gram, Neisser in metilen modro (ali toluidin modro).

Zdravljenje davice

Posebna obravnava davice je uporaba antidifterinega antitoxičnega seruma, ki vsebuje vsaj 2000 ie na ml. Serum se daje intramuskularno v odmerkih od 10 000 do 400 000 ie, odvisno od resnosti poteka bolezni. Učinkovita metoda zdravljenja je uporaba antibiotikov (penicilinov, tetraciklinov, eritromicinov ipd.) In sulfanilamidnih pripravkov. Za spodbujanje razvoja lastnih antitoksinov se lahko uporabi anatoxin. Za sproščanje bakterijskega transporta je treba uporabiti tiste antibiotike, ki jim je ta sev corynebacteria zelo občutljiv.

Specifična profilaksa davice

Glavni način boja proti davici je masa rutinsko cepljenje prebivalstva. V ta namen različne izvedbe uporabo cepiva, vključno kombinacijo, tj. E. Namenjen hkratnem oblikovanju odpornosti proti več patogenov. Najpogostejše cepivo v Rusiji je bilo DTP. To se adsorbira na aluminijev hidroksid brozgo pertusisnih bakterije pokončanih s formalinom ali timerosal (20 milijard v 1 ml) in obsega toksoid davice flokulacijsko dozo 30 enot in 10 enot tetanusa vezave 1 ml. Cepili otroke od 3 mesecev starosti, nato pa preživeli cepljenje: prvi 1,5-2 let pozneje v starosti od 9 do 16 let, nato pa vsakih 10 let.

Zaradi masovnega cepljenja, začetega v ZSSR leta 1959, je bila incidenca davice v državi do leta 1966 v primerjavi z letom 1958 zmanjšana za 45-krat, njen indeks leta 1969 pa 0,7 na 100 000 prebivalcev. Sledi v 80. Letih. XX stoletje. Zmanjšanje obsega cepljenja je povzročilo resne posledice. V letih 1993-1996. Rusija je prizadela epidemija davice. Starši so bili bolni, večinoma niso bili cepljeni, in otroci. Leta 1994 je bilo registriranih skoraj 40 tisoč bolnikov. V zvezi s tem se je nadaljevalo množično cepljenje. V tem obdobju je bilo cepljenih 132 milijonov ljudi, od tega 92 milijonov odraslih. V letih 2000-2001, pokritost otrok s cepljenjem v predpisanem obdobju je bila 96%, obnovitveno cepivo pa 94%. Zaradi tega se je incidenca davice v letu 2001 zmanjšala za 15-krat v primerjavi z letom 1996. Vendar pa je treba za zmanjšanje pogostnosti posameznih primerov s cepljenjem v prvem letu življenja vključiti vsaj 97-98% otrok in v naslednjih letih zagotoviti velik obnovitveni odmerek. Za doseganje popolne izločitve davice v prihodnjih letih verjetno ne bo mogoče zaradi razširjenega nosilca toksigenih in nontoksigenih bakterij proti davici. Za rešitev tega problema bo trajalo nekaj časa.