Diagnoza herpesa

Diagnozo herpesa temelji na vodenju klasičnih virusnega titra pri občutljive celične kulture, imunofluorescenco in serološke metode, izvedbo colposcopic študije z uporabo modernih molekularno-bioloških metod (PCR, pika-hibridizacija), ki omogoča diagnozo vso skupino herpesvirus, vključno s HHV-6 in HHV-7 vrste.

Metode laboratorijske diagnostike herpetične okužbe

Glavne metode, namenjene izločanju HSV ali odkrivanju virusnih delcev in / ali njihovih sestavin	Pomožne metode za odkrivanje protiteles proti HSV v bioloških tekočinah človeškega telesa
Izolacija HSV v občutljivih kulturah celic in živali Neposredna in imunska elektronska mikroskopija Neposredne in posredne možnosti MFA IFA Molekularne biološke metode Reakcijska reakcija z lateksom	Reakcija nevtralizacije RSK Določanje protiteles proti nestrukturnim proteinom HSV-1,2

Dokazano je, da ima 76% bolnikov genitalni herpes (GH), ki ga povzroča HSV-2, in v 24% - HSV-1. In GG kot monoinfekcija je prišlo samo pri 22% bolnikov, v 78% primerov so odkrili mikrobna združenja. Pri 46% bolnikov je bila odkrita parazitocenoza, ki sta jo povzročila dva patogena, vključno s klamidijo, v 40% primerih. Manj pogosto so v brisih določili gardnerelly, Trichomonas, gonokocci.

Pri 27% bolnikov je parazitocenoza predstavljala tri in 5,2% s štirimi patogeni. In pogosteje je bila kombinacija klamidije s Gardnerella in glivicami Candida. Ti podatki upravičujejo potrebo po temeljitem bakteriološko preiskavo bolnikov YY bi opredelili patogene kombinacije uslužbence, kot tudi poglobljeno študijo o patogenezi mešanih okužb urogenitalnega trakta, kar bi omogočilo za diferencirano kompleksnega zdravljenja okužbe s HSV.

Materiali, ki jih je treba raziskati pri izolaciji HSV, odvisno od lokalizacije herpetičnih lezij

Lokalizacija lezij	Vsebina veziklov	Strganje celic				SDC	Aspirat iz bronhijev	Bioptat	Krvava
		1	2	3	4
Usnje	+								+
Oči			+						+
Genitalia				+					+
Anus	+				+				+
Usta	+	+							+
CNS	+					+		+	+
Lahka		+					+		+
Jetra								+	+
Vročinski herpes	+	+	+				+		+

Metode laboratorijske diagnoze okužbe s citomegalovirusom

Metode	Čas, potreben za doseganje rezultatov	Opombe
VIRUSOLOŠKI
Elektronska mikroskopija	3 ure	Tumping
Izolacija virusa v celični kulturi (CPD)	4-20 dni	Standard, Slow
Imunofluorescijsko barvanje zgodnjega AH z monoklonskimi protitelesi	6 ur	Manj specifično
CITOLOGIJSKI	2-3 ure	Manj specifično
SEROOLIČIČKI
RSK	2 dni	Standart
Ssubsistence	1 dan	Težko
REEF	6 ur	Enostavno, specifično
NFIF	6 ur	Zapleteno
RIMF	6 ur	Zapleteno
IFA (IgM, TO)	6 ur	Hitro, preprosto
Imunoblot	6 ur	Drage
MOLEKULARNO BIOLOŠKO
MG	5-7 dni	Dražje, dolgotrajno
PCR	3 ure	Drage

Metode za diagnosticiranje virusa herpes zoster

Diagnostične metode	Laboratorijske tehnike
INDIRECT
Dodelitev	Fabrika kulture, piščančji zarodki, laboratorijske živali, soobdelava s permisivnimi celicami ali pomočnimi virusi
Identifikacija izolatov	Reakcija nevtralizacije, DSC, IF, IPPE, reakcija izolatov obarjanj, aglutinacija, IF
DIRECT
Citologija	Smears: barvna imunofluorescenca
Histologijo	Patomorfologija celice
Struktura	Embrionalna mikroskopija, imunoelektronska mikroskopija
Določanje antigenov	IF, PIÉF, RIM, IFA
Določitev lokalne proizvodnje protiteles	Ig M, Ig G, Ig A: IFA, RIA
Molekularni biološki pristopi	Molekularna hibridizacija, PCR

Laboratorijska diagnoza okužbe, ki jo povzroča virus herpes zoster

Diagnostične težave	Metode	Pričakovani rezultati
Akutna primarna okužba	1	Odkrivanje po 2 urah
	2	Raven protiteles raste počasi
	3	Prisotni 3 dni po okužbi
Akutna reaktivirana okužba	1	Odkrivanje ULV v 2 urah
	2	Raven protiteles raste počasi
	4	Prisotni 4 dni po pojavu izpuščaja

1. določitev v tekočini veziklov WIEF;
2. serologija: DSC, ELISA, namenjena prepoznavanju
3. serologija: ELISA, namenjena odkrivanju IgM;
4. serologija: ELISA, namenjena odkrivanju IgA, IgM.

Metode za prikaz imunskega odziva okužbe zaradi virusa herpes zoster

Pristop	Metoda
Odkrivanje povečanega titra protiteles v drugem serumu	RSK, RTGA, RPGA, reakcija nevtralizacije IF, RIM, ELISA
Odkrivanje protiteles IgG IgG, specifičnih za razred, v prvem vzorcu seruma	IFA, IF, RIM, lateks-aglutinacija

Razlaga rezultatov serološke preiskave bolnikovih serumov na okužbah s herpesvirusom (ELISA)

Ime okužbe / markerja	Povprečni pragovi za okužbe
	Rezultati analize	Tolmačenje
Cytomegaly Anti-CMV IgG (1-20 E / ml) Anti-CMV IgM (100-300%)	Pozitivno 1-6 Pozitivno 6-10 Pozitivno> 10 Negativno Pozitivno 100-300 Negativno <90 Doubtful 90-100	Remission poslabšanje bolezni akutna faza bolezni brez okužbe (bolezni) akutna faza bolezni ponovite analizo po 2-3 tednih
Herpes preprosti 1,2 serotipi Anti-HSV 1/2 skupaj. (100-900%)	Pozitivno 100-400 Pozitivno 400-800 Pozitivno> 800 Negativno <100	Remission poslabšanje bolezni akutna faza bolezni brez okužbe (bolezni)

V tabeli so prikazane glavne metode laboratorijske diagnostike okužb herpesvirusa, kot tudi priporočeni biološki materiali, ki so raziskani za izolacijo HSV, ob upoštevanju lokalizacije herpetičnih lezij

Zanesljiva je dodelitev herpes simpleksa in CMV z okužbo občutljivih celičnih kultur. Tako je bilo v virološkem pregledu 26 bolnikov v obdobju ponovitve HSV izolirano na občutljivi celični kulturi Vero v 23 primerih (88,4%). Okuženega Kulture smo opazili značilne vzorec citopatskega učinka HSV - tvorbo večjedrne celic velikank ali skupek zaokrožen in povečanja količine celic v obliki grozdov. V 52,1% primerov je bilo mogoče 16 do 24 ur po okužbi odkriti žarišča citopatskega učinka virusa. Do 48-72 ur inkubacije okuženih kultur se je odstotek materialov, ki povzročajo specifično uničenje celic, povečal na 87%. In le v 13% primerov so bili pozitivni rezultati odkriti 96 ur po okužbi in več ali z večkratnim prehodom.

Metode laboratorijske diagnoze splošne herpetične okužbe

Glavne metode so bile namenjene odkrivanju (izolaciji) herpesvirusov, njihovih delcev in njihovih sestavin	Pomožne metode za odkrivanje protiteles proti virusu herpesa v bioloških tekočinah, odkrivanje encimskih sprememb v krvnem serumu
Osamitev virusa Herpes na dovzetne celične kulture in živali Neposredno in imunski elektronsko mikroskopijo Metoda neposrednega ali posrednega imunoperoksidazni izvedbah direktnih in indirektnih možnosti fluorescentne tehnika protitelo možnosti ELISA izvedbah molekulske (DNA-DNA) hibridiziranje verižne reakcije s polimerazo reakcija lateksa aglutinacije	Nevtralizacija reakcija vezanja komplementa Reakcijsko lateks aglutinacijski Indirektni fluorescenčni Postopek protitelo izvedba Indirektni Postopek imunoperoksidazni varianta izvedbe ELISA metoda imunski blot radialno posnetek Metoda komplementa določanje vrednosti alanin in aspartat

Da bi diagnosticirali nalezljivo mononukleozo (okužbo, ki jo povzroča VEB), se uporabljajo serološke metode. Reakcija Paul Bunnela z eritrociti ovna, diagnostični titer 1:28 in višja z eno študijo seruma ali 4-kratno povečanje protiteles pri pregledu seznanjenih serumov. Uporabite Goff-Bauerjevo reakcijo s suspenzijo 4% formaliziranih rdečih krvnih celic konja. Rezultat se upošteva po 2 minutah, z infekcijsko mononukleozo je reakcija zelo specifična.

Trenutno se razvija encimski imunološki test (ELISA) za diagnosticiranje infekcijske mononukleoze. V tem primeru se protitelesa IgG in IgM v serumu pacienta določata z inkubacijo z limfoblastami, okuženih z EBV, čemur sledi zdravljenje s fluorescentnimi protitelesi. V akutnem obdobju bolezni se protitelesa proti virusnemu kapsidnemu antigenu določijo v titru 1: 160 in več.

Pri uporabi več uvoženih komercialnih testnih sistemov v IFA lahko opredeli: protitelesa proti mravelj protiteles ovoja Egan EBV zgodnjega antigena EBV, celotnega protitelesa na zgodnji antigena EBV, določena v akutni fazi bolezni in v jedru in v citoplazmi in omejenega protitelesa EBV zgodaj, določena v akutni fazi bolezni in v jedru in v citoplazmi celic, z mejo protitelesa proti EBV zgodnjega antigena, določene v sredi bolezni le v citoplazmi celic in protitelesa proti EBV jedrni antigen. Uporaba teh testnih sistemov omogoča diferencialno diagnozo številnih bolezni, povezanih z EBV.

Po pozitivnem ELISA da prepoznajo protitelesa EBV dajejo imunoblot potrjuje odziv, ki zaznavajo prisotnost protiteles, da ločimo EBV markerske proteine (p-proteini): P23, P54, P72 (prisotnost proteina kaže možnost razmnoževanje EBV), str 138. Omenjeni nad laboratorijskimi metodami se uporabljajo za nadzor učinkovitosti zdravljenja.

Občutljivost viroloških metod je 85-100%, specifičnost je 100%, čas učenja je 2-5 dni. Pogosto se v praksi uporablja metoda direktne imunofluorescence (PIF) s poliklonskimi ali monoklonskimi protitelesi proti HSV-1 in HSV-2. Metoda UIF se lahko enostavno reproducira v običajnem kliničnem laboratoriju, ni drago, občutljivost je nad 80%, specifičnost je 90-95%. Z imunofiuorescencno mikroskopija je pokazala prisotnost citoplazme vključkov, morfološke značilnosti, odstotek okuženih celic v brisov, strganje sečevodov, materničnega vratu kanal, maternični vrat, danke.

Metoda UIF daje idejo o morfoloških lastnostih celic in spremembah pri lokalizaciji HSV antigenov. Poleg neposrednih znakov celične poškodbe s herpes virusi (odkrivanje specifične luminescence), so po indikativnih podatkih UIF indirektni znaki herpetične okužbe:

• združevanje jedrske snovi, piling karyoolme;
• prisotnost ti. Jedrske "luknje", kadar le ena kariolemma ostane iz jedra celice;
• prisotnost intranuklearnih vključkov - Caudryjevo tele.

Pri določanju UIF zdravnika prejme ne samo kakovost, temveč tudi kvantitativno oceno okuženih celic, ki smo bili, ki se uporabljajo za ocenjevanje učinkovitosti protivirusnega zdravljenja z aciklovir (AC). Tako je z metodo UIF v dinamiki preučevalo 80 bolnikov s preprostim genitalnim herpesom (GG). Izkazalo se je, da se, če se pred zdravljenjem z aciklovirja v brisom je imelo 88% bolnikov visok odstotek okuženih celic (50-75% in več), po enem teku aciklovirja v brisom 44% bolnikov z zdravimi celicami odkrite v 31% primerov označene posamezne okužene celice in 25% bolnikov je imelo do 10% okuženih celic.

Vsebnost okuženih celic v brisih (reakcija PIF) bolnikov z genitalnim herpesom, zdravljenih z aciklovirjem

Obdobja bolezni	Odstotek v brisih
	Okuženih celic					Normalne celice
	Več kot 75%	50-75%	40-50%	10%	Enotne celice v n / sp
Relapse (pred zdravljenjem)	25%	63%	12%
	(20)	(50)	(10)
Remisija (po zdravljenju)				25%	31%	44%
				(20)	(25)	(35)

Z leti UIF in metodo hibridizacije pik skoraj 100% primerov sovpada z rezultati študije. Treba je opozoriti, da je, da bi povečali zanesljivost diagnoze GH, še posebej v primerih, ko obstaja subklinične in malomanifestnyh oblike herpes, je priporočljivo uporabiti metodo laboratorijske diagnostike 2-3, zlasti pri preučevanju nosečnice, ženske s porodniške zgodovino prikrajšanega, ljudi z nedoločeno ginekološki diagnozo.

Tako je za PCR diagnostiko virusnih in bakterijskih infekcij urogenitalnega trakta je treba oceniti pozitivne rezultate z zgodovino, prisotnost (ali odsotnosti) specifičnih kliničnih simptomov. Če se s PCR odkrije klamidija, je v tem primeru mogoče govoriti o okužbi in ustrezno rešiti težave s terapijo. V primeru odkritja mikoplazem (ureaplasmas) so oportunistične patogene, za potrditev je potrebna diagnoza izvesti kulture nadaljnje raziskave, t. E. žetve Material iz občutljiva bolniku celičnih kulturah. Šele ko dobimo pozitivne rezultate v analizi kulture, lahko govorimo o laboratorijski potrditvi diagnoze mikoplazmoze. Enaka metoda bo po potrebi omogočila določitev občutljivosti izoliranih mikoplazem na pogosto uporabljane medicinske oblike (antibiotiki, fluorokinoloni itd.).

Morda je ena stopnja okužba z več virusi iz družine Nepresviridae. Pogosto smo odkrili okužbo enega bolnika s HSV-1, HSV-2 in CMV virusi. Veliko pogosteje okužene z več virusi herpesa so bili bolniki s kliničnimi in laboratorijskimi manifestacijami sekundarnega IDS (bolniki z onkogematološko, onkološko, okuženo s HIV). Tako se kaže, da klinične in imunološke motnje, ki se napredujejo pri okužbi z virusom HIV, spremlja povečanje števila herpesvirusov, odkritih z metodo molekularne hibridizacije. V tej prognostično najpomembnejši se lahko šteje za kompleksno enostopenjsko detekcijo DNA tipa HSV-1, CMV in HHV-6.

[1], [2], [3]