Vitamin A v krvi

Referenčne vrednosti (norma) koncentracije vitamina A (retinola) v krvnem serumu: pri otrocih 1-6 let - 0,7-1,5 μmol / l, 7-12 let - 0,91-1,71 μmol / l, 13 -19 let - 0,91-2,51 μmol / l; pri odraslih je 1,05-2,09 μmol / l.

Vitamin A se nanaša na topnimi v maščobah in obstaja v dveh oblikah - dejanski vitamin A ali retinol (najti le v živalskih proizvodov) in pro-vitamina A, znan kot karoten (pripravljen iz živalskega ali rastlinskega izvora), ki se lahko pretvori v retinol v stenah prebavni trakt. Približno 50-90% retinola dohodnega hrane absorbira v tankem črevesu in transportira v hilomikronov povezanih s kompleksom v jetra, kjer se shranijo v obliki retinola palmitat. Če je potrebno, se sprosti v krvni obtok v obliki retinola, ki je v kombinaciji z vitaminom A-vezavnim beljakovinam. V serumu se kompleks proteina + retinola, ki veže vitamin A, veže na transtiretin. Iz seruma se retinol ujamejo s ciljnimi celicami, kot so retine fotoreceptorji in epitelij.

Ko vitamin A vstopi v telo, ki presega zahteve (180-430 μg retinola na dan glede na starost, spol in fiziološko stanje), se njen presežek odloži v jetrih, ki tvori depo tega vitamina. Z zmanjšanim vnosom retinola iz hrane se hranila v jetrih sproščajo v krvni obtok, vzdržujejo koncentracijo retinola v serumu pri normalni ravni (nad 0,7 μmol / L). Druge biološko aktivne oblike vitamina A (mrežnica in retinoinska kislina) so prisotne v krvi v zelo nizkih koncentracijah (pod 0,35 μmol / L); na estrih retinola predstavlja približno 5% celotnega vitamina A (0,1-0,1 μmol / l).

Vitamin A ima pomembno vlogo pri oksidacijsko-redukcijskem procesu. Retinol pospešuje nastajanje glikogena v jetrih in mišicah, izboljšuje holesterola v krvi sodeluje pri sintezi steroidnih in spolnih hormonov. To je potrebno za rast in tvorbo kosti okostja resynthesis za rhodopsin, in tudi prispeva k normalnemu delovanju sluznice in epitela pokrova kožo, preprečuje njeno metaplazija, hiperkeratoza in prekomerno levitev. Vitamin A pomaga krepiti lase, zobe in dlesni. V zadnjih letih pa kaže raznolik vlogo vitamina A pri preprečevanju raka in regulacijo imunosti (ki je bistvena za dokončanje fagocitozo, poveča sintezo Ig, stimulira nastajanje ubijalk T celic, stimulira tipa T pomagalk II idr.). Vitamin A - aktivni antioksidant, v glavnem deluje v prisotnosti vitamina E; ščiti vitamin C pred oksidacijo. Pomanjkanje vitamina A se obravnava kot dejavnik tveganja za maligne neoplazme. V poskusnih študijah je bilo dokazano, da povečanje vsebnosti vitamina A v prehrani poveča povprečno življenjsko dobo za 17,5%. Cink je bistveni kofaktor metabolizma vitamina A (potreben za sintezo proteina, ki veže vitamin A).

Povprečna dnevna zahteva za retinol za odrasle (20-50 let) je 1,2 mg (4000 ie, 1 ie je enako 0,3 μg retinola), za nosečnice 1,5 mg (5000 ie), za dojenje 1, 8 mg (6000 ie), za ljudi nad 60 let - 2,5 mg (10.000 ie). Vsaj tretjino dnevne zahteve retinola je treba dostaviti telesu v gotovi obliki; preostanek se lahko absorbira z uporabo karotenoidov, katerih retinol tvori v telesu. Upoštevati je treba, da približno 30% retinola v živilih uniči s toplotno obdelavo. Dejavnost retinola je 2-krat višja od karotena, poleg tega pa se le-ta absorbira v črevesju le 30-40%. Zato pri oceni vnosa v hrano velja, da 1 mg retinola približno ustreza 6 mg karotenoidov.

Določanje retinola (vitamina A) in karotenoidov v serumu glede na Bessey v modifikaciji LA Anisimova

Načelo metode

Določanje vitamina A in karotenoidov temelji na njihovi hidrolizi v raztopini alkalnega alkohola, čemur sledi ekstrakcija z mešanico organskih topil.

Reagenti

• 11 M raztopina kalijevega hidroksida (KOH).
• 96% etanola.
• 1 M raztopina kalijevega hidroksida (KOH) v 96% etilnega alkohola: 1 volumen 11 M raztopine KOH pomešamo z 10 volumnov 96% etilnega alkohola. Reagent pripravimo na dan študije. Če med mešanjem pride do obarvanja, je treba pred uporabo alkohol očistiti z destilacijo.
• Xylol, hp.
• Oktan, h.ch.
• Mešanica ksilen-oktana: pripravljena z mešanjem enakih volumnov ksilena in oktana.

Raziskave se izvajajo na spektrofotometru.

Potek določanja vitamina A

Krv, odvzeta s prsta (približno 1 ml), se vnese v etiketo za centrifugo in v 20-30 minutah postavi v stekleno posodo s toplo vodo (temperatura 40-45 ° C). Za ločitev seruma krvni strdek skrbno zavijemo ob rob cevi s tankim steklenim drogom in centrifugiramo pri 3000 obratih na minuto 10 minut.

Izberite 0,12 ml seruma in ga prenesemo v aglutinacijsko epruveto, nato dodamo 0,12 ml raztopine 1 M alkohola kalijevega hidroksida. Vsebina je temeljito pretresena.

Preskusne cevi s sondi se dajo v vodno kopel 20 minut pri temperaturi 60 ° C za hidrolizo.

Vzorce ohladimo in dodamo 0,12 ml mešanice ksilen-oktana, močno stresamo 10-15 sekund. Ponovno ohladimo in centrifugiramo.

Previdno odstranite zgornji sloj, ki vsebuje vitamin A in karotenoide z pipeto Pasteur z gumijasto posodo in jo prenesite na mikro-cvetove.

Vzorci so spektrofotometrični pri valovni dolžini 328 nm - za določanje vitamina A in pri valovni dolžini 460 nm - za določanje karotenoidov.

Po spektrofotometrijo se preučevali vzorec izpostavi ultravijoličnemu sevanju za uničenje vitamina A. V ta namen je na razdalji 15-20 cm od kvarčne microcuvettes določenem (bakterijska) svetilko tako, da je obsevanje izpostavljen del kivete, napolnjene s tekočino; čas izpostavljenosti 45-60 minut.

Vzorci so večkrat spektrofotometrični pri valovni dolžini 328 nm. Vsebnost vitamina A se določi iz razlike v vrednosti ekstinkcije (optična gostota), ob upoštevanju koeficienta (faktorja) 637, ki ga Bessey izračuna za vitamin A.

Izračun se izvede po formuli:

X = 637 × (E328 (1) - E328 (2)),

Kjer je X vsebnost vitamina A, μg / dL; 637 je koeficient, ki ga Bessey izračuna za določanje vitamina A; E328 (1) - optična gostota raztopine pred obsevanjem; E328 (2) je optična gostota raztopine po obsevanju.

Koeficient prenosa koncentracije vitamina A iz μg / dL v μmol / l je 0,035.

Vsebnost karotenoidov se izračuna po formuli:

X = 480-E480,

Kjer je X vsebnost karotenoidov, μg / dL; 480 je koeficient, ki ga Bessey izračuna za določitev karotenoidov; E480 je optična gostota preskusne raztopine.

Opomba:

Po podatkih Besseyja lahko med študijami vzamemo večje ali manjše serumske količine, vendar mora biti njegovo razmerje z volumnom alkoholne raztopine konstantno s kakršno koli spremembo volumna (količine) ksilen-oktanske zmesi.

Norma v vsebnosti vitamina A v krvnem serumu je: pri novorojenčkih in dojenčkih - 160-270 μg / l; pri odraslih 1,05-2,45 μmol / l (300-700 μg / l). Vsebnost karotenoidov v serumu za odrasle je 800-2300 μg / l.