Imunofenotipizacija hemoblastoz

Pomemben napredek pri hematoloških raziskav, povezanih v zadnjih letih z uporabo sodobnih imunoloških metod in avtomatiziranih orodij za analizo in celic periferne krvi in kostnega mozga sortiranje - cytometers toka. Tradicionalni morfološke in cytochemical študija bolezni substrata celic (kri, rdeča kostnega mozga, bezgavke, vranico, itd), v številnih primerih, še posebno v limfoproliferativne bolezni, niso pokazale celo različne možnosti med morfološko podobne oblike in ugotoviti izvor patološkega klona . Te probleme je mogoče rešiti le s preučevanjem imunološke lastnosti celic. Vsaka stopnja diferenciacije hematopoetske celice ima svoj nabor antigenov, ki so na mednarodni klasifikaciji znan kot diferenciacijo in diferenciacije so razdeljeni v skupine, imenovan CD.

Pri bloku diferenciacije neoplastičnih sprememb se lahko pojavi na katerikoli stopnji normalen razvoj celic, kar ima za posledico patološkega celičnega klona opredelitev bolezni substrata in ima enako imunološko (ali fenotipske) karakteristiko. Potem se študija teh označevalcev v celicah lahko določijo koli obliki ali izvedbi bolezni so skladni, tj na osnovi imunološke celic fenotip diferencialno diagnozo, ki je v Limfoproliferativna najtežji, saj so glavni celični substrati patološke bolezni skoraj isto vrsto celic morfološko.

Fenotipizacija omogoča tipizacijo eksplozivnih in zrelih krvnih celic mielo-, mono- in limfocitnih serij z uporabo monoklonskih protiteles s prisotnostjo diferenciacijskih antigenov (receptorjev) v celični steni. V poglavju "Vrednotenje imunskega stanja organizma" so delno opisane značilnosti in diagnostični pomen celičnih markerjev; Spodaj je kratek opis antigenskih celičnih markerjev, ki se uporabljajo za diagnozo hemoblastoze. Na membranah krvnih celic in rdečega kostnega mozga je mogoče identificirati naslednje antigene (označevalce).

• CD2 je monomerni transmembranski glikoprotein. Prisoten je na površini vseh krožečih T-limfocitov in nekaterih NK-limfocitov. CD2 sodeluje v procesu alternativne aktivacije T-limfocitov. Za odkrivanje CD2 z monoklonskimi protitelesi v klinični praksi se uporablja za fenotipizacijo akutnih T-celičnih levkemij, limfomov, kroničnih vnetnih in imunsko pogojenih stanj.
• CD3 - proteinski kompleks, povezan z antigensko specifičnim T-celičnim receptorjem, je glavni funkcionalni marker T-limfocitov. Omogoča prenos aktivacijskega signala iz membrane v citoplazmo celice. Ugotovitev CD3 je indicirana za diagnozo akutne T-celične levkemije, limfoma (CD3 ni izražen pri tumorjih limfnih celic, ki niso T-celice) in bolezni imunske pomanjkljivosti.
• CD4 je transmembranski glikoprotein, izražen s subpopulacijo T-pomagačev (induktorjev), ki predstavljajo 45% limfocitov periferne krvi. V zgodnjih fazah razvoja limfocitov v timusu, CD4 antigene, pa tudi CD8, izražajo vsi kortikalni limfociti. Medularni timocitov, ki je podoben fenotip zrelih CD4 + T-celic periferne krvi (T celice pomagalke), bodisi že izražajo CD4 ali CD8 receptorje. V periferni krvi je do 5% celic sočasno označenih s CD4 in CD8. Rahlo izražanje CD4 je možno pri nekaterih celicah monocitov. CD4 je izražena v večini primerov, celični limfom, T, vključno fungoidnega granuloma, in-HTLV povezan T celične levkemije (HTLV - T-limfotropni virusa humane - Human T-limfotropni virus).
• CD5 - enocerićni glikoprotein, prisoten na vseh zrelih T-limfocitih in većino timocitov, je B-limfocit slabo izražen. CD5 je odkrit na neoplastičnih celicah kronične limfocitne levkemije B in celico citocitnega limfoma. Pri drugih vrstah malignih limfoidnih bolezni - folikularni limfom, levkemija dlakavice, velik celični limfom - CD5 ni izražen.
• CD7 je enostranski protein, ki je prvi marker T-celične diferenciacije. Izražajo ga pro-T-limfociti, še preden se selijo v timus. CD7 je odkrit na večini NK celic, na monocitih pa opažamo šibek izraz. B-limfociti in granulociti ne vsebujejo tega antigena. Opredelitev CD7 se uporablja za diagnozo limfomov, otroške T-celične limfoblastne levkemije.
• CD8 je protein, sestavljen iz dveh polipeptidnih verig, povezanih z disulfidnimi mostovi. Izraža se s subpopulacijo citotoksičnih in supresorskih T limfocitov, ki obsegajo 20-35% limfocitov periferne krvi. Ta antigen ima tudi NK limfocite, kortikalne timocite, 30% medularnih timocitov in subpopulacijo celic rdečega kostnega mozga. CD8 preučujemo za kvantitativno oceno vsebnosti T-supresorja (glejte poglavje "T-limfociti-supresorji v krvi" zgoraj).

• CD10 je endopeptidaza, povezana s celično membrano. CD10 izraža mlade oblike B limfocitov in subpopulacijo kortikalnih limfocitov. CD10 izražajo vse celice ALL.
• CD11c ekspresne makrofage, monociti, granulociti, celice NK in celice levkemije celice na celični membrani.
• CD13 je glikoprotein, ki ga izražajo mielomonocitne celice (progenitorne celice, nevtrofili, bazofili, eozinofili, monociti in celice mieloidne levkemije). Odsoten je pri T in B limfocitih, eritrocitih in trombocitov.
• CD14 je površinski membranski glikoprotein. Izražajo ga predvsem monociti in makrofagi. CD14 je odkrit v več kot 95% monocitov periferne krvi in kostnega mozga. Pri akutni mieloblastni levkemiji so opazili močan izraz CD14. Pri akutni in kronični limfoblastni levkemiji ta antigen ni izražen.
• CD15 je oligosaharid. Sodeluje pri procesih fagocitoze in kemotaksije. Ta antigen je prisoten na površini zrelih granulocitov in celic Berezovsky-Sternberg. Izražanje CD15 antigena se odkrije pri Hodgkinovi bolezni. V ne-Hodgkinovih limfoma CD15 v večini primerov ni zaznan.
• CD16 je izražen na površini granulocitov, monocitov, makrofagov in NK celic. Vsi limfociti, ki izražajo ta antigen, imajo sposobnost celične citotoksičnosti, odvisne od protiteles. CD16 se določi pri tipizaciji kroničnih mielocitnih levkemij, da bi označili NK celice.
• CD19 je glikoprotein, prisoten na vseh perifernih B limfocitih, kot tudi na vseh predhodnih sestavinah B celic. Na plazemskih celicah je odsoten. To je prvi marker B-celic, ima pomembno vlogo pri uravnavanju aktivacije in proliferacije B-limfocitov. CD19 je izražen na vseh neoplastičnih celicah akutne levkemije B-celičnega izvora in je prisoten tudi v nekaterih oblikah akutne monoblastne levkemije.
• CD20 je ne-glikoziliran protein. V ontogenezi B-limfocitov se CD20 antigen pojavlja po CD19 na stopnji pred-B-celične diferenciacije limfocitov. Na plazemski membrani plazemskih celic je odsoten. Izraža se pri ALL, B-celični kronični limfocitni levkemiji, levkemični celični celici, Burkittovem limfomu in zelo redko pri akutni monoblastni levkemiji.
• CD21 je glikoprotein, v znatni količini je prisoten na B-limfocitih v limfoidnih organih in v majhni količini na B-celicah periferne krvi. CD21 je receptor za virus Epstein-Barr.
• CD22 je protein, sestavljen iz dveh polipeptidnih verig. Izraža se na membrani večine B-limfocitov, vključno s progenitorskimi celicami (prolimfociti). Antigen ni izražen na B-limfocitih (plazemske celice) po njihovi aktivaciji. Najbolj izrazit izraz CD22 je odkrit na celicah z dlakavo celično levkemijo, šibko - pri mieloidnih levkemijah in ne-T-celicah ALL.
• CD23 je glikoprotein, izražen z aktiviranimi B-limfociti periferne krvi, v veliko večji meri. CD23 posreduje citotoksičnost in fagocitozo, odvisno od IgE, z makrofagi in eozinofili.
• CD25 je enociklični glikoprotein, identificiran kot receptor z nizko afiniteto za IL-2. Ta receptor se izrazi na aktiviranih T-limfocitih in pri nižji gostoti na aktiviranih B-celicah. V periferni krvi zdravih ljudi je antigen prisoten v več kot 5% limfoidnih celic.
• CD29 je fibronektinski receptor. Je široko porazdeljena v tkivih, izražena z levkociti. Obdelava CD29 na celicah periferne krvi se uporablja za tipizacijo subpopulacije T celic, ki imajo fenotip CD4 + CD29 +, imenovan pomočnik tipa 2 (Th2). Te celice s proizvodnjo limfokinov sodelujejo pri uresničevanju humoralnega imunskega odziva.
• CD33 je transmembranski glikoprotein. Prisoten je na površini celic mieloidne in monocitne serije. Najdeno je na površini monocitov in v manjši meri granulocitov periferne krvi. Približno 30% celic rdečega kostnega mozga izražajo CD33, vključno z mieloblastami, promielociti in mielociti. Antigen je odsoten na membranah pluripotentnih izvornih celic. CD33 se uporablja za karakterizacijo celic v mieloidnih levkemijah. Leukemske celice limfnega in eritroidnega izvora ne izražajo CD33.
• CD34 je fosfoglikoprotein, ki ga izražajo hematopoetske progenitorne celice, vključno z monopotentnimi izvornimi celicami. Najbolj izrazit izraz Ar je opazen v zgodnjih prednikih; ko zorijo celice, izraz markerja pade. CD34 najdemo tudi na endotelijskih celicah. CD34 se uporablja za karakterizacijo celic v akutni mielogeni in limfoblastni levkemiji. S kronično limfocitno levkemijo in limfomi se ekspresija CD34 antigena ne zazna.

• CD41a izraža trombociti in megakariociti. Za diagnosticiranje megakariblasticne levkemije se uporabljajo monoklonska protitelesa za odkrivanje CD41a. S Glązmann trombastenijo je ekspresija tega antigena odsotna ali znatno zatrta.
• CD42b je membranski glikoprotein, sestavljen iz dveh polipeptidnih verig. Marker se nahaja na površini trombocitov in megakariocitov. V klinični praksi se za diagnosticiranje trombocitopatije - Bernard-Soulierjevega sindroma odkrije CD42b.
• CD45RA spada v razred transmembranskih glikoproteinov. To je pogosti levkocitni antigen. Izraža se na celični membrani B-limfocitov, v manjši meri T-limfocitov in na zrelih medularnih timocitih. Marker ni izražen z granulociti.
• CD45RO je izoforma nizke molekulske mase CD45RA - skupni levkocit Ag. Najdejo jih na T-celicah (spominski T-limfociti), subpopulacijah B-limfocitov, monocitih in makrofagih. Monoklonska protitelesa proti CD45RO interakcijo z večino timocitov, subpopulacijo mirovnih CD4 + in CD8 + T-limfocitov in zrele aktivirane T-celice. Ta antigen nosijo tudi celice mielomonocitnega izvora, granulociti in monociti. Ugotovljeno je v centroblasticnih in imunoblasticnih limfoma.
• CD46-O-glikozilirani dimer. To se porazdeli po tkivih in izražena T in B limfocitov, monocitov, granulocite, NK celic, trombocitih, endotelijskih celic, fibroblastov, temveč je odsoten na površini eritrocitov. CD46 zagotavlja zaščito tkiv pred komplementom.
• CD61 je trombocitni antigen. Izraža se na trombocitov periferne krvi in rdečega kostnega mozga ter na megakariocitih in megakariblostih. Njegova definicija se uporablja kot označevalec akutne megakaroblasticne levkemije. Izražanje antigena je odsotno ali zatreti pri bolnikih s trombastenijo Glanzmann.
• CD95, imenovan tudi Fas ali APO-1, je transmembranski glikoprotein, član družine receptorjev tumorske nekroze. Izraža se v znatnih količinah na T-limfocitih periferne krvi (CD4 + in CD8 +) in v manjši meri na B-limfocitih in NK celicah. Ta antigen se izraža tudi na granulocitih, monocitih, tkivnih celicah in neoplastičnih celicah. Vezava CD95 na Fas ligand (CD95L) povzroča apoptozo v celicah.
• CD95L ali Fas ligand, membranski protein, ki pripada družini receptorjev faktorja tumorske nekroze. Ta antigen je izražen s citotoksičnimi T limfociti, NK celicami in zelo pogosto s tumorskimi celicami; glavni povzročitelj apoptoze v celicah.
• HLA-DR je monomorfen determinant molekul razreda II glavnega kompleksa humane histokompatibilnosti (HLA). Marker je izražen na Langerhansovih celicah, dendritične celice limfnih organov, in nekatere vrste makrofagov, limfocitov B, aktivirane celice T in priželjca epitelijskih celic. Test za ta marker se uporablja za količinsko opredelitev aktiviranih T-limfocitov s fenotipom CD3 + HLA-DR +.

Z uporabo drugačnega izbora monoklonskih protiteles do markerjev je mogoče narediti fenotipski portret celic, značilen za določeno obliko levkemije.

Poleg z uporabo tehnik immunophenotyping za diagnostiko in diferencialno diagnozo hematoloških malignih bolezni, še posebej pomembno obrnil njihovo uporabo v procesu zdravljenja, da oceni stanje remisije in preostale populacije levkemična celic. Poznavanje fenotipske "portret" peskalnih celic v času diagnoze, s temi oznakami lahko našli mobilni levkemična klon v remisiji, in s povečanjem njihovega števila - napovedati razvoja recidiva dolgo (za 1-4 mesecev), dokler svojih kliničnih in morfoloških lastnosti.

[1], [2], [3], [4],