13c ureazni test: priprava, rezultati, pozitiven, negativen

Od odkritja bakterije Helicobacter pylori, povezane s kroničnim gastritisom ter razjedami na želodcu in dvanajstniku, so bile razvite diagnostične metode, vključno z ureaznim testom, ki omogoča odkrivanje teh mikroorganizmov pri določenem bolniku, potrditev njihove vpletenosti v razvoj bolezni prebavil in predpisovanje učinkovitega zdravljenja.

Encim ureaza kot biomarker okužbe s Helicobacterjem

Bakterije H. pylori se pred kislim okoljem v lumnu želodca zaščitijo na dva načina. Prvič, mikroorganizmi s svojimi flagelami poškodujejo sluznico in dosežejo njene spodnje plasti, vse do epitelijskih celic, kjer je pH višji (tj. kislost je nižja). Drugič, bakterije nevtralizirajo kislino s sintezo velikih količin katalitično aktivnega visokomolekularnega metaloencima ureaze ali urea amidohidrolaze.

Uporaba ureaze pri diagnozi Helicobacterja je mogoča ne le zaradi citoplazmatske aktivnosti tega encima, temveč tudi zaradi zunanje interakcije z gostiteljskimi celicami.

Pod delovanjem ureaze pride do razgradnje želodčne sečnine v vodikov nitrid (amoniak) in ogljikov dioksid (ogljikov dioksid). Reagirajo s klorovodikovo kislino v želodčnem soku in zagotavljajo območje nevtralne kislosti okoli H. pylori, poleg tega pa podpirajo presnovo bakterijskih celic.

Zato je ureaza najpomembnejši dejavnik pri kolonizaciji H. pylori v človeški želodčni sluznici, odkrivanje ureolitične aktivnosti pa velja za biomarker virulence te bakterije, ki ga gastroenterologi – z izvajanjem ureaznega testa – uporabljajo za diagnosticiranje okužbe s Helicobacterjem, pa tudi za spremljanje rezultatov uničenja (eradikacije) bakterij, ki ga povzročijo zdravila.

Diagnostika H. pylori vključuje invazivne in neinvazivne teste – odvisno od tega, ali je potreben endoskopski pregled želodca (fibrogastroduodenoskopija) ali ne. Invazivni test je hitri ureazni test ali ekspresni ureazni test (RUT-test), ki zahteva odvzem vzorcev tkiva (biopsija). 13C ureazni dihalni test (13C-UBT) je najpogostejši neinvazivni test.

Treba je opozoriti, da se neinvazivna diagnostika H. pylori lahko izvede z uporabo krvnega testa za protitelesa (specifičnost na ravni 75 %, občutljivost - 84 %), ELISA testa urina (z občutljivostjo 96 % in specifičnostjo 79 %) in koprograma za bakterijske antigene. Več informacij - Okužba s Helicobacter pylori: protitelesa proti Helicobacter pylori v krvi

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Indikacije za postopek test ureaze

Kolonizacija želodčne sluznice s H. pylori sama po sebi ni bolezen, temveč dejavnik povečane bakterijske obremenitve telesa, kar lahko pod določenimi pogoji sproži razvoj številnih patologij želodca in zgornjih prebavil.

Indikacije za diagnostiko okužbe s Helicobacterjem, zlasti ureazni test, so povezane z gastritisom s povečano kislostjo, antralnim in atrofičnim gastritisom, duodenitisom, razjedo na želodcu in dvanajstniku, želodčnim MALT limfomom. Po endoskopski resekciji zgodnjega raka želodca se lahko histološki pregled izvede v kombinaciji s hitrim ureaznim testom - FGDS z ureaznim testom.

Gastroenterologi lahko predpišejo ureazni test, če se bolniki pritožujejo nad občutkom teže in nelagodja v epigastrični regiji, pogostim zgago po jedi, kislim ali gnilim spahovanjem, grenkobo v ustih, slabostjo, črevesnimi motnjami, bolečinami ali krči v želodcu.

[ 8 ], [ 9 ]

Priprava

Priprava na dihalni test z 13C sečnino vključuje prenehanje jemanja antibiotikov 4 tedne pred testom, nesteroidnih protivnetnih zdravil (NSAID), zaviralcev protonske črpalke (ki zmanjšujejo kislost želodca) in antacidov ali adsorbentov za zgago pa vsaj dva tedna prej. Jemanje kakršnih koli zdravil je treba prenehati pet do šest dni, pitje alkohola in kajenje pa tri dni pred testom.

Priporočljivo je tudi, da se približno teden dni pred testiranjem izogibate uživanju stročnic, saj fižol, grah, leča, soja in bob vsebujejo ureazo (ki rastline ščiti pred boleznimi in škodljivci).

Večer pred testom je pozna obilna večerja kontraindicirana, na dan testiranja morate izvajati običajno ustno higieno, uro in pol pred testom pa ne smete piti ničesar ali uporabljati žvečilnih gumijev.

[ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ]

Tehnika test ureaze

Tehnika izvedbe:

• Najprej se odvzame osnovni vzorec dihanja – izdih se naredi v mehko plastično posodo (in se hermetično zapre);
• tekočina z dodano 13C-sečnino se jemlje peroralno;
• Po 25–30 minutah se v drugo posodo odvzame drugi vzorec izdihanega zraka.

Tako pridobljeni vzorci se analizirajo na masnem spektrometru z ločevanjem izotopov v drugem vzorcu in določitvijo njihove koncentracije. Razlika med vrednostmi v drugem in prvem vzorcu je izražena kot delta (δ) v primerjavi z izhodiščno ravnjo. Normalne vrednosti, tj. negativne vrednosti označenega atoma 13C pri neokuženih bolnikih, se gibljejo od 0,15 do 0,46 %, pozitivne vrednosti ob prisotnosti okužbe pa so 1,2 do 9,5 % s hitrostjo hidrolize sečnine več kot 12 do 14 μg/min.

Preprosto povedano: odkrivanje ogljikovega dioksida, označenega z 13C, v izdihanem zraku kaže, da je ureaza H. pylori hidrolizirala sečnino, kar dejansko potrjuje njeno prisotnost v želodcu.

Dihalni test s H. pylori

13C-UBT test ali 13C urea v izdihanem zraku za Helicobacter pylori je ena najpomembnejših neinvazivnih metod za odkrivanje te okužbe: s 100-odstotno občutljivostjo in 98-odstotno specifičnostjo je tveganje za lažno pozitivne in lažno negativne rezultate v primerjavi s histologijo in testiranjem krvi na protitelesa za 2,3 % manjše.

Analiza temelji na hidrolizi peroralno zaužitega tekočega sečninskega seruma, označenega z atomom ogljika (stabilni neradioaktivni izotop) 13C (50–75 mg 13C-sečnine, razredčene v 100 ml tekočine), z ureazo H. pylori.

Sečnina, označena z izotopskim indikatorjem, se v želodcu hidrolizira s sproščanjem amonijaka in ogljikovega dioksida, ki vsebuje označene atome, ki difundira v kri in se med dihanjem izloča iz pljuč. Označeni ogljikov dioksid se zabeleži z analitično napravo - masnim spektrometrom, katerega delovanje temelji na nedisperzni izotopsko-selektivni spektroskopiji, ali infrardečim spektroskopskim analizatorjem.

Hitri ureazni test

Hitri ureazni test (RUT) se izvaja med endoskopskim pregledom želodca in dvanajstnika – z uporabo sodobnih endofibroskopov – in sočasnim odvzemom vzorcev biopsije. Biomaterial naj bi se odvzel iz antralnega dela želodca. Fibrogastroduodenoskopija ali FGDS z ureaznim testom je torej invazivna diagnostična metoda.

Pridobljeni biopsijski material se popolnoma potopi v pripravljen standardiziran medij, ki vsebuje agar-agar, sečnino, kislinsko-bazni indikator fenolsulfoftalein in bakteriostatično sredstvo (dodano za preprečevanje rasti kontaminirajočih mikroorganizmov in lažno pozitivnih rezultatov).

Če so v vzorcu želodčnega tkiva prisotne bakterije H. pylori, bo ureaza, ki jo proizvajajo, hidrolizirala sečnino in zvišala pH, kar je jasno vidno, ko se indikator spremeni iz rumene v oranžno (pri pH 6,8) in vijolično (pri pH > 8). 75 % pozitivnih testov spremeni barvo v 120–180 minutah, in hitreje kot indikator spremeni barvo, večje je število bakterij. Testi, ki so videti negativni, pa se hranijo 24 ur.

Pozitiven hitri test ureaze, kaj to pomeni? Pozitiven test RUT – indikator postane rdeč – pomeni, da vzorec biopsije, postavljen v agarni medij, vsebuje vsaj 105 bakterij H. pylori, čeprav je njihova koncentracija običajno višja.

Občutljivost različnih modifikacij testov se giblje v območju 90-98 %, specifičnost pa 97-99 %.

Kot ugotavljajo gastroenterologi, če bolnikov zaključek kaže na močno pozitiven ureazni test (trije križci), to pomeni: pH > 8, indikator pa je spremenil barvo v manj kot 60 minutah od trenutka potopitve biopsije, kar kaže na veliko število H. pylori in visoko raven izražanja ureaze. Približno število bakterij je mogoče prešteti med histološkim pregledom biopsije pod mikroskopom, in če presega 40-50 na vizualiziranem območju, se stopnja okužbe šteje za visoko.

Dihalni test z 13C sečnino redko daje lažno pozitivne rezultate, pri bolnikih s sumom na razjedo na želodcu ali dvanajstniku pa se za potrditev diagnoze šteje en pozitiven test, medtem ko je treba negativni rezultat potrditi z EGD s testom za sečnino.