Mikrobiološka preiskava sputuma

Mikrobiološka preiskava je najpomembnejši člen pri diagnostičnem iskanju in preverjanju povzročitelja pljučnice. Vključuje ne le izolacijo povzročitelja, temveč tudi preučevanje njegovih lastnosti, vključno z občutljivostjo na različna zdravila z baktericidnim in bakteriostatičnim delovanjem.

V ta namen se uporablja metoda sejanja sputuma na različna hranilna gojišča. V vzorcu sputuma, dostavljenem v laboratorij, se izberejo gnojne grudice in jih skrbno sperejo v petrijevki z izotopsko raztopino natrijevega klorida, kar do neke mere omogoča, da se osvobodijo mikroflore zgornjih dihal. Sejanje gnojnih grudic sputuma se izvede na različna hranilna gojišča, katerih sestava je opisana v posebnih priročnikih o mikrobiologiji. Gojišča s semeni se inkubirajo pri 37,5 °C 24 ur. Iz vzgojenih kolonij se izolirajo čiste kulture, identificirajo se z znanimi mikrobiološkimi metodami in določi se njihova občutljivost na antibiotike.

Za določitev kvantitativne vsebnosti mikroorganizmov se sputum homogenizira, zmeša s hranilno juho in iz mešanice pripravijo zaporedne desetkratne razredčitve, ki se nato inokulirajo na petrijevke s krvnim agarjem. Po 24 urah inkubacije pri 37,5 °C se upoštevajo rezultati, pri čemer se preštejejo kolonije iste vrste po videzu in upošteva stopnja razredčitve materiala. Iz kolonij se pripravijo razmazi, ki se pregledajo pod mikroskopom.

Interpretacija rezultatov

Interpretacija rezultatov mikrobiološke preiskave sputuma je precej zapletena, kar je razloženo s številnimi dejavniki. Zgoraj je bilo že omenjeno nenehno zasejavanje bronhialne vsebine z mikrofloro zgornjih dihal in ustne votline ter pogosta prisotnost večine najpogostejših povzročiteljev bolezni dihal (pnevmokoki, streptokoki, stafilokoki itd.) v normalni traheobronhialni vsebini zdravih ljudi. V zvezi s tem izolacija v sputumu med mikrobiološkimi študijami asociacije različnih mikroorganizmov, od katerih je večina v tem konkretnem primeru oportunističnih, izjemno otežuje ugotavljanje povzročitelja bolezni. Zato je pri interpretaciji rezultatov mikrobiološke preiskave sputuma treba upoštevati kvantitativno prevlado določene vrste bakterij (več kot 10 ⁶ -10 ⁷ mc/ml), pojav določenih mikroorganizmov v fazi poslabšanja in njihovo izginotje v obdobju remisije. Zelo pomembno je upoštevati klinično sliko bolezni.

Glavni in možni povzročitelji različnih kliničnih oblik pljučnice

Klinična oblika pljučnice	Glavni patogeni	Možni patogeni
Krupoz	Pnevmokoki	Streptokoki, Klebsiella
Po gripi	Stafilokoki, pnevmokoki, klebsiella	Haemophilus influenzae, streptokoki
Abscesiranje	Stafilokoki, bakteroidi, mešana flora	Klebsiella, Pseudomonas aeruginosa
Aspiracija	Bakteroidi, anaerobni streptokoki	Stafilokoki, pnevmokoki
Po operaciji	Stafilokoki	Pnevmokoki, Klebsiella
Vmesni oglas	Mikoplazme	Povzročitelji ornitoze in psitakoze
Sekundarna pljučnica pri hospitaliziranih bolnikih brez predhodnega antibakterijskega zdravljenja	Stafilokoki, pnevmokoki, klebsiella, bakteroidi	Escherichia coli, serratia itd.
Sekundarna pljučnica se je razvila na ozadju antibakterijske terapije	Fakultativni patogeni mikroorganizmi	Pseudomonas, Serratia, Klebsiella, Staphylococcus, Proteus itd.
Pri bolnikih s kroničnim bronhitisom	Pnevmokoki, Haemophilus influenzae	Stafilokoki, streptokoki
Pri bolnikih z alkoholizmom	Pnevmokoki, Haemophilus influenzae, Klebsiella	E. coli, protozoji
Pri sindromu pridobljene imunske pomanjkljivosti	Pneumocystis, glive	Citomegalovirusi
Pri bolnikih, katerih oskrbo zagotavljajo zunanji strokovnjaki	Pnevmokoki, stafilokoki, hemofilna papila	Klebsiella, Escherichia coli

Pri kvantitativni oceni rezultatov študije mikrobne kontaminacije pri bolnikih s pljučnico je treba upoštevati izjemno visoko občutljivost tega kazalnika na predpisovanje antibiotikov. Že kratkotrajno zdravljenje z antibakterijskimi zdravili lahko povzroči močno zmanjšanje mikrobne kontaminacije, kar ne omogoča ustrezne ocene rezultatov študije sputuma. Zato je priporočljivo zbrati sputum pred predpisovanjem antibiotičnega zdravljenja.

Prav tako je treba opozoriti, da se za gojenje znotrajceličnih povzročiteljev pljučnice (mikoplazma, legionela, klamidija, rikecija) uporabljajo posebni selektivni hranilni mediji. Rutinsko mikrobiološko testiranje z uporabo običajnih hranilnih medijev (agar-agar) nikoli ne da pozitivnih rezultatov. Zato je treba izbiro specifičnih metod mikrobiološkega testiranja opraviti s sodelovanjem lečečega zdravnika, ki je dolžan obvestiti laboratorijskega zdravnika o svojih sumih glede morebitne vloge znotrajceličnih povzročiteljev pri pojavu pljučnice pri tem bolniku.

Dodati je treba, da v resnični klinični praksi že tehnično popolna mikrobiološka preiskava sputuma omogoča identifikacijo patogena v največ 40–60 % primerov. Zato se za preverjanje patogena lahko uporabijo druge sodobne raziskovalne metode. Informativnost bakteriološke študije je mogoče znatno povečati z uporabo traheobronhialnega aspirata, tekočine, pridobljene med bronhoalveolarno lavažo (BAL), bronhoskopijo itd., namesto sputuma kot biološkega materiala, ki se preučuje.

Poleg tega se za identifikacijo povzročiteljev pljučnice lahko uporabijo metoda imunofluorescence različnih bioloških materialov (bronhoskopski material, kri, plevralna vsebina itd.), diagnostične metode PCR in preučevanje ravni specifičnih protiteles v krvnem serumu. Žal te diagnostične metode še niso našle široke klinične uporabe in se trenutno uporabljajo le v velikih specializiranih centrih in laboratorijih.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]