Virus hepatitisa A.

Virusni hepatitis A je človeška nalezljiva bolezen, za katero je značilna prevladujoča okvara jeter in se kaže kot klinično zastrupitev in zlatenica. Virus hepatitisa A smo odkrili v 1973 S. Feynstonom Z metodo imunskega elektronsko mikroskopijo in s inficiranje opicah (et al.) - šimpanzi in marmozetkah. Postopek imunska elektronska mikroskopija je, da je blato filtratu dodamo hepatitisa Bolnik specifičnih protiteles (okrevanja seruma) in oborino smo podvrgli elektronsko mikroskopijo. Zaradi interakcije z virusi s specifičnimi protitelesi, so podvržene specifičnemu agregiranju. V tem primeru jih je lažje odkriti in združevanje pod vplivom protiteles potrjuje specifičnost patogena. Odkritje S. Feinstone je bilo potrjeno v poskusih na prostovoljcih.

Virus hepatitisa A ima sferično obliko, premer viriona pa je 27 nm. Genom predstavlja enostransko pozitivna RNA z maso 2,6 MD. Supercapsid je odsoten. Tip simetrije je kubično - ikozahedron. Kapsid ima 32 kapsomov, ki ga sestavljajo štirje polipeptidi (VP1-VP4). S svojimi lastnostmi virus hepatitisa A spada v rod Heparnovirus, družino Picornaviridae. Antigenskega virusa hepatitisa A (virus HAV - hepatitisa A) je homogen. HAV se dobro razmnožuje v telesu šimpanzov, pavzonov, hamadrylov in opic na srečo (marmosetov). Že dolgo časa virus ni mogel gojiti. Šele v osemdesetih letih. Je bilo mogoče pridobiti celične kulture, v katerih se HAV razmnožuje. Sprva se uporablja za te namene, ovekovečena embrionalne ledvične celična linija Rhesus makak (kultura FRhK-4), in zdaj - presajenih ledvic celična linija zelene opice (Kultura 4647).

Po priporočilih strokovnjakov Svetovne zdravstvene organizacije, sprejeta naslednja imena virusa hepatitisa A označevalcev: virus hepatitisa A - so Nau protitelesa proti virusu hepatitisa A: anti-HAV IgM in anti-HAV IgG.

HAV so majhni delci s premerom 27-30 nm, ki imajo simosičje ikeradne oblike in imajo homogenost. Na vzorcu elektronske difrakcije, pridobljenem z metodo imunske agregacije, se detektirajo elektronsko gosti delci s površinsko določenimi simetrično razporejenimi kapsomeri. Z negativnim kontrastom se v pripravkih odkrijejo tako popolni kot prazni delci. Nucleocapsid NAV, za razliko od gripe, nima površinskih izboklin in membran. Pomembno je tudi, da virion HAV nima strukture v obliki srca.

V skladu s svojim fizikalno-kemijskih lastnosti virusa hepatitisa A, ki je v zvezi z družino picornaviridae, rod enterovirus z atomskim številom 72. Vendar je bila ta taksonomija preveč nenavadno, in WHO ugotovila, da je mogoče, da zapusti terminologija "virus hepatitisa A".

Kot vsi virusi družine Picornaviridae virus virusa hepatitisa A vsebuje ribonukleinsko kislino. Nekateri laboratoriji so pokazali možnost kloniranja genoma virusa hepatitisa A, kar odpira možnost pridobivanja pripravkov za cepivo.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7],

Odpornost virusa hepatitisa A

Virus je relativno odporen na visoke temperature, kisline, maščobna topila (ni lipidov), dezinfekcijska sredstva, dopušča nizko temperaturo. Vse to prispeva k dolgoročni ohranitvi v zunanjem okolju. Pri sobni temperaturi preživi več tednov, pri 60 ° C pa delno izgubi infektivnost po 4-12 urah, popolnoma - po nekaj minutah pri 85 ° C. Visoko odporen na klor, zaradi česar je sposoben prodreti v vodovodno vodo skozi ovire čistilnih naprav.

Če povzamemo vse podatke, lahko virus hepatitisa A opisujemo kot sledi:

• naravni mojster je človek;
• eksperimentalne živali - marmozet, šimpanza;
• vir okužbe - iztrebki;
• bolezen - epidemija in endemična bolezen;
• oddajna pot je fekalno-oralna;
• inkubacijsko obdobje - 14-40 dni;
• prehod na kronični hepatitis - ni opaziti.

Imunološke lastnosti NAV so naslednje:

• Prototipni sevi - Ms-l, CR-326, GVG. Vsi so imunološko podobni ali enaki;
• Protitelesa - IgM in IgG sta proizvedena kot odgovor na uvajanje strukturnih proteinov virusa in sta zaščitna;
• I Trofično delovanje humane serumske y-globulina - ščiti ali zmanjšuje bolezen pod pogojem dajanja pred okužbo ali med inkubacijskim obdobjem.

Fizikalno-kemijske lastnosti NAU so naslednje:

• Morfologija je sferični delci s kubičnimi simetriji, ki jih sestavljajo 32 kapsomerjev;
• Premer je 27-30 nm;
• SsS1 Gostota (g / cm3) - 1,38-1,46 (prazni delci), 1,33-1,34 (zrel virioni), 1.29-1.31 (nezrele virioni, prazne delci);
• Koeficient sedimentacije je 156-160 odraslih virionov;
• Nukleinska kislina - enojedna, linearna RNA;
• Relativna molekulska masa - 2,25 106-2,8 106KD;
• Število nukleotidov je 6.500-8.100.

Stabilnost NAV v fizikalno-kemijskih učinkih je naslednja:

• Kloroform, eter - je stabilen;
• Klor, 0,5-1,5 mg / l, 5 ° C, 15 min - delna inaktivacija;
• Kloramin, 1 g / l, 20 ° C, 15 min - popolna inaktivacija;
• Formalin, 1: 4000, 35-37 ° C, 72 ur - popolna inaktivacija, 1: 350, 20 ° C, 60 min - delna inaktivacija.

Temperatura:

• 20-70 ° C - stabilno;
• 56 ° C, 30 minut - stabilen;
• 60 ° C, 12 ur - delna inaktivacija;
• 85 ° C, 1 min - popolna inaktivacija;
• Avtoklaviranje, 120 ° C 20 minut - popolna inaktivacija;
• Suha toplota, 180 ° C, 1 ura - popolna inaktivacija;
• UV, 1,1 W, 1 min - popolna inaktivacija.

Predstavljeni podatki kažejo, da so fizikalno-kemijske lastnosti virusa hepatitisa najbližje enterovirusom. Tako kot drugi enterovirusi je HAV odporen na številne razkužilne raztopine, popolnoma inaktiviran nekaj minut pri 85 ° C in avtoklaviran.

Izkazalo da hepatitisa lahko virus razmnožuje v primarnih in neprekinjene enoslojne kulture celičnih linij človeških in opicah. Še posebej aktivno razmnoževanje virusa hepatitisa A v in vitro kulturah opazimo pri uporabi kot vhodna snov ekstrakti bolnikov jetrne opice. Vendar je treba poudariti, da je v vseh poskusih v skladu z reprodukcijo virusa hepatitisa A v in vitro kulturah omeniti dolge inkubacijske dobe v primarnih prehodov (-10 do 4 tedne), nato kopičenje virusnih genskega materiala povečanja, ki pa absolutne vrednosti zelo mladoletnik, ki povzroča številne raziskovalce govoriti nepopolne replikacije virusa hepatitisa A v tkivnih kulturah.

Če povzamemo podatke iz literature o razmnoževanju virusa hepatitisa A iz nekorenskih kultur, lahko rečemo, da je dejstvo, da je HAV in vitro daljše izkušnje nesporno. Optimalni pogoji za stabilno visoko stopnjo replikacije virusov niso bili dokončno ugotovljeni in to omejuje preučevanje njegovih bioloških lastnosti, izdelavo vir reagentov za izdelavo diagnostike in načrtovanje cepiv.

Hkrati pa v literaturi najdemo bolj optimistične sodbe o tem problemu. Rešitev vseh vprašanj, povezanih z gojenjem virusa hepatitisa A, je v bližnji prihodnosti. Pri proučevanju optimalne pogoje HAV razmnoževanje v celični kulturi embrionalnih ledvičnih Rhesus opicah niso pokazale dveh fazah: faza infekciozne proizvodnjo virusa (do 6-8 dni na 5. Prehoda) in fazo intenzivnega kopičenja virusnega antigena. Prav tako je pokazala, da je najbolj pomembna akumulacija virusni antigen poteka v tako imenovanem roler gojenje (rotacijski bučk). Na ta način se odpirajo široke možnosti za pridobitev kulturnega antigena v velikih količinah, zato se bo pojavil izhodiščni material za pripravo diagnostičnih sistemov in izdelavo pripravkov za cepivo.

Epidemiologija hepatitisa A

Virus hepatitisa A ima visoko patogenost za ljudi. Po zaključku Svetovne zdravstvene organizacije (WHO) (1987) je za pojav bolezni dovolj, da okuži samo en virion. Vendar pa je praktični infektivni odmerek verjetno precej višji. Vir okužbe je samo okužena oseba. Virus se sprosti v velikih količinah z iztrebki 12-14 dni pred pojavom zlatenice in v treh tednih. Ikterično obdobje. Pomembne razlike v izolaciji patogena pri bolnikih z ikterično, zlatenico in asimptomatskimi oblikami hepatitisa A niso bile ugotovljene. Metoda okužbe je fekalno-oralno, predvsem vodno, pa tudi po gospodinjstvih in živilskih poteh. Metoda okužbe je fekalno-oralno, predvsem vodno, pa tudi po gospodinjstvih in živilskih poteh. Glavni (primarni) način prenosa virusa je voda. Možna je tudi okužba v zraku. Občutljivost prebivalstva je univerzalna. V glavnem so bolni otroci, mlajši od 14 let. Bolezen ima izrazito jesensko-zimsko sezono.

[8], [9], [10], [11], [12], [13], [14], [15]

Simptomi hepatitisa A

Inkubacijska doba se giblje od 15 do 50 dni, odvisno od velikosti odmerka kužnega virusa, vendar v povprečju 28-30 dni. Ko v telesu, virusa hepatitisa A replicira v regionalnih bezgavkah, v kri in nato jetrnih celicah in povzroči razpršeno akutni hepatitis, ki jo spremlja poškodbe jeter hepatocitov in retikuloendotelijskega celic in zmanjšanjem njegovih razstrupljanje in pregrade funkcij. škoda hepatocitov ne nastane zaradi neposrednega delovanja virusa, kot posledica immunopatološke mehanizmov. Najbolj Značilna slika hepatitisa A akutna ikteričnih ciklična oblika: inkubacijski čas je napovedujejo (preicteric), zlatenica in okrevanje obdobje. Vendar pa je v žarišč okužbe kaže veliko število bolnikov z asimptomatsko in anicteric oblike okužbe, katerih število prevladuje nad ikteričnih ( "ledene gore fenomena").

Post-nalezljiva imuniteta je močna in dolgotrajna, ki jo povzročajo virusna nevtralizirajoča protitelesa in celice imunskega spomina.

Mikrobiološka diagnoza hepatitisa A

Diagnozo hepatitisa A (razen okužbe živali - šimpanzi marmozet, pavianih, ki smo jo) na osnovi različnih imunoloških metod: DGC metodi imunofluorescenco, hemaglutinacije imunskega oprijema (Kompleksna virusnega antigena + protitelesa v prisotnosti komplementa, adsorbirane na eritrocite in povzroča njihovo adhezijo) . Vendar pa je uporaba teh metod je omejena zaradi pomanjkanja posebnih virusnih antigenov in imunofluorescenco reakcijo zahteva jetrne biopsije, ki je nezaželeno. Zanesljiva in specifična je metoda imunske elektronske mikroskopije, vendar je zelo težko. Zato je še edini sprejemljiv način za imunološke reakcije je imunsko preiskovalno trdne faze v obliki IPM ali RIM, zlasti v modifikaciji "zajemanje" imunoglobulina M. Pri nas v ta namen predlaga testnega sistema - "Diag-A-GEO". Načelo delovanja tega preskusnega sistema je naslednje. Na stenah polistirena lunochek sorbiran prvih protiteles imunoglobuline razreda M (antiimmunoglobuliny M) nato dodamo preiskovanega seruma pacientov. Če je razred IgM, bodo veže na protitelo-Ti-M, nato pa dodamo k posebni virusni antigen (virus hepatitisa A), ki je pridobljen z gojenjem v celični kulturi. Sistem se splakne in ji dodamo antivirusna protitelesa označeni s hrenovo peroksidazo. Če je prišlo do medsebojnega delovanja vseh štirih komponent sistema, je štiri plast "sendvič":

• antiimunoglobulini M,
• imunoglobulini M (proti virusu hepatitisa A - v pacientovem testnem serumu),
• virusni antigen,
• protivirusna protitelesa, označena z encimom.

Za zaznavanje tega kompleksa se na lutke doda substrat za encim. Pod vplivom encima se uniči in nastane barvni izdelek. Intenzivnost barve se lahko kvantitativno izmeri s spektrofotometrom ali fotokolimeterom.

Prednost metode "zajema" IgM je, da se protitelesa tega razreda imunoglobulinov pojavijo pri primarnem imunskem odzivu in kažejo aktivno stopnjo okužbe, izginejo po preneseni bolezni. Protivirusna protitelesa, ki spadajo v razred IgG, nasprotno, vztrajajo dlje časa po bolezni, kar zagotavlja pridobljeno imunost. Za odkrivanje virusa hepatitisa A je predlagana metoda sonde DNA: kot sondo se uporablja komplementarna sonda vRNA.

Zdravljenje hepatitisa A

Zaradi dejstva, da je proizvodnja interferona prekinjena pri virusnem hepatitisu, zdravljenje hepatitisa A temelji na uporabi interferona in induktorja njegove endogene sinteze amiksina.

Posebno preprečevanje hepatitisa A

Prej široko uporabljajo seroprevention hepatitisa A, z uporabo gammaglobulin ni bil upravičen pa je poudarek na držalni imunizaciji, izvedemo cepljenje proti hepatitisu A. V ta namen se razvijajo različne različice cepiv in se že uporabljajo. V Rusiji je bilo učinkovito cepivo proti hepatitisu A pridobljeno leta 1995, zdaj pa je bilo uspešno uporabljeno.