Virus hepatitisa A

Virusni hepatitis A je nalezljiva bolezen ljudi, za katero je značilna predvsem okvara jeter, klinično pa se kaže z zastrupitvijo in zlatenico. Virus hepatitisa A je leta 1973 odkril S. Feinstone (et al.) z metodo imunske elektronske mikroskopije in okužbo opic - šimpanzov in marmozetk. Bistvo metode imunske elektronske mikroskopije je, da se filtratu blata bolnika s hepatitisom A dodajo specifična protitelesa (rekonvalescentni serum) in sediment podvrže elektronski mikroskopiji. Zaradi interakcije virusov s specifičnimi protitelesi pride do specifične agregacije. V tem primeru jih je lažje zaznati, agregacija pod vplivom protiteles pa potrjuje specifičnost povzročitelja. Odkritje S. Feinstona je bilo potrjeno v poskusih na prostovoljcih.

Virus hepatitisa A je sferične oblike, premer viriona je 27 nm. Genom predstavlja enoverižna pozitivna RNA z mm 2,6 MD. Superkapside ni. Tip simetrije je kubičen - ikozaeder. Kapsida ima 32 kapsomerov, tvorijo jo štirje polipeptidi (VP1-VP4). Glede na svoje lastnosti virus hepatitisa A spada v rod Heparnovirus, družino Picornaviridae. Glede antigenov je virus hepatitisa A (HAV - virus hepatitisa A) homogen. HAV se dobro razmnožuje v telesu šimpanzov, pavijanov, pavijanov hamadrije in opic marmozetk. Dolgo časa virusa ni bilo mogoče gojiti. Šele v osemdesetih letih prejšnjega stoletja je bilo mogoče pridobiti celične kulture, v katerih se HAV razmnožuje. Sprva so za te namene uporabljali kontinuirane celične linije ledvic zarodka rezus makaka (kultura FRhK-4), zdaj pa se uporablja kontinuirana celična linija celic ledvic zelene opice (kultura 4647).

V skladu s priporočili strokovnjakov SZO je bila sprejeta naslednja nomenklatura označevalcev virusa hepatitisa A: virus hepatitisa A - protitelesa HAV proti virusu hepatitisa A: anti-HAV IgM in anti-HAV IgG.

HAV je majhen delec s premerom 27-30 nm, ki ima ikozaedrično simetrijo in je homogen. Elektrogram, pridobljen z metodo imunske agregacije, razkriva elektronsko goste delce s površinsko nameščenimi simetrično razporejenimi kapsomeri. Z negativnim kontrastiranjem se v preparatih razkrijejo tako polni kot prazni delci. Nukleokapsida HAV, za razliko od influence, nima površinskih izboklin in membrane. Pomembno je tudi, da virion HAV nima srčaste strukture.

Virus hepatitisa A je glede na svoje fizikalno-kemijske lastnosti razvrščen v družino pikornavirusov, rod enterovirusov s serijsko številko 72. Vendar se je ta taksonomija izkazala za preveč nenavadno in SZO je menila, da je mogoče ohraniti terminologijo »virus hepatitisa A«.

Kot vsi virusi iz družine Picornaviridae tudi virus hepatitisa A vsebuje ribonukleinsko kislino. Nekateri laboratoriji so dokazali možnost kloniranja genoma virusa hepatitisa A, kar odpira možnosti za pridobitev cepiv.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Odpornost na virus hepatitisa A

Virus je relativno odporen na visoke temperature, kisline, maščobna topila (brez lipidov), razkužila in dobro prenaša nizke temperature. Vse to prispeva k njegovi dolgotrajni ohranitvi v zunanjem okolju. Pri sobni temperaturi preživi več tednov, pri 60 °C delno izgubi svojo kužnost po 4–12 urah, pri 85 °C pa popolnoma po nekaj minutah. Je zelo odporen na klor, zaradi česar lahko prodre v vodo iz pipe skozi pregrade čistilnih naprav.

Če povzamemo vse podatke, lahko virus hepatitisa A označimo na naslednji način:

• naravni gostitelj je človek;
• poskusne živali - marmozetke, šimpanzi;
• vir okužbe so iztrebki;
• bolezen je epidemična in endemična;
• pot prenosa: fekalno-oralna;
• inkubacijska doba - 14-40 dni;
• prehod v kronični hepatitis - ni opaziti.

Imunološke lastnosti HAV so naslednje:

• Prototipni sevi - Ms-1, CR-326, GВG. Vsi so imunološko podobni ali identični;
• Protitelesa - IgM in IgG, nastajajo kot odgovor na vnos strukturnih beljakovin virusa in so zaščitna;
• I. Zaščitni učinek človeškega serumskega gama globulina - preprečuje ali ublaži bolezen, če se ga da pred okužbo ali med inkubacijsko dobo.

Fizikalno-kemijske značilnosti NAU so naslednje:

• Morfologija: sferični delec brez lupine s kubično simetrijo, kapsida je sestavljena iz 32 kapsomerov;
• Premer - 27-30 nm;
• Gostota v CsCl (g/cm3) - 1,38-1,46 (odprti delci), 1,33-1,34 (zrel virion), 1,29-1,31 (nezreli virioni, prazni delci);
• Sedimentacijski koeficient - 156-160 zrelih virionov;
• Nukleinska kislina je enoverižna, linearna RNA;
• Relativna molekulska masa - 2,25 x 106–2,8 x 106KD;
• Število nukleotidov je 6.500–8.100.

Stabilnost HAV pod fizikalnimi in kemičnimi vplivi je naslednja:

• Kloroform, eter - stabilen;
• Klor, 0,5–1,5 mg/l, 5 °C, 15 min – delna inaktivacija;
• Kloramin, 1 g/l, 20 °C, 15 min - popolna inaktivacija;
• Formalin, 1:4000, 35–37 °C, 72 ur – popolna inaktivacija, 1:350, 20 °C, 60 min – delna inaktivacija.

Temperatura:

• 20–70 °C – stabilno;
• 56 °C, 30 min - stabilno;
• 60 °C, 12 ur - delna inaktivacija;
• 85 °C, 1 min - popolna inaktivacija;
• Avtoklaviranje, 120 °C. 20 min - popolna inaktivacija;
• Suha toplota, 180 °C, 1 ura - popolna inaktivacija;
• UFO, 1,1 W, 1 min - popolna inaktivacija.

Predstavljeni podatki kažejo, da je virus hepatitisa A po svojih fizikalno-kemijskih lastnostih najbližji enterovirusom. Tako kot drugi enterovirusi je tudi HAV odporen na številne razkužilne raztopine in se popolnoma inaktivira v nekaj minutah pri 85 °C in avtoklaviranju.

Dokazano je, da se virus hepatitisa A lahko razmnožuje v primarnih in neprekinjenih enoslojnih linijah človeških in opičjih celičnih kultur. Posebej aktivno razmnoževanje virusa hepatitisa A v kulturah in vitro opazimo pri uporabi jetrnih izvlečkov bolnih opic kot izhodnega materiala. Vendar je treba opozoriti, da se v vseh poskusih razmnoževanja virusa hepatitisa A v kulturah in vitro opozarja na dolgo inkubacijsko dobo med primarnimi pasažami (do 4-10 tednov), nato pa se kopičenje virusnega genskega materiala poveča, vendar absolutne vrednosti ostajajo zelo nepomembne, kar mnogim raziskovalcem daje podlago za govorjenje o nepopolni replikaciji virusa hepatitisa A v tkivnih kulturah.

Če povzamemo podatke iz literature o razmnoževanju virusa hepatitisa A v zunajtkivnih kulturah, lahko rečemo, da je dejstvo dolgoročnega preživetja HAV in vitro nedvomno. Optimalni pogoji za stabilno visoko raven replikacije virusa še niso bili dokončno določeni, kar ovira preučevanje njegovih bioloških lastnosti, pridobivanje vira reagentov za proizvodnjo diagnostičnih sredstev in načrtovanje cepiv.

Hkrati pa je v literaturi mogoče najti bolj optimistične sodbe o tej problematiki. Rešitev vseh vprašanj, povezanih z gojenjem virusa hepatitisa A, je stvar bližnje prihodnosti. Pri preučevanju optimalnih pogojev za razmnoževanje HAV v kulturi embrionalnih ledvičnih celic rezus makaka sta bili opredeljeni dve fazi: faza proizvodnje infekcijskega virusa (do 6-8 dni na ravni 5. pasaže) in faza intenzivnega kopičenja virusnega antigena. Pokazalo se je tudi, da do največjega kopičenja virusnega antigena pride v pogojih tako imenovane valjčne gojitve (vrtljive bučke). Ta metoda odpira široke možnosti za pridobivanje kulturnega antigena v velikih količinah, posledično pa se bo pojavil izvorni material za pripravo diagnostičnih sistemov in izdelavo cepiv.

Epidemiologija hepatitisa A

Virus hepatitisa A je za ljudi zelo patogen. Po podatkih SZO (1987) je za povzročitev bolezni dovolj okužba že z enim virionom. Vendar pa je praktični infekcijski odmerek verjetno veliko višji. Edini vir okužbe je okužena oseba. Virus se v velikih količinah izloča z blatom 12–14 dni pred pojavom zlatenice in v 3 tednih ikteričnega obdobja. Pri bolnikih z ikterično, anikterično in asimptomatsko obliko hepatitisa A niso ugotovili pomembnih razlik v izločanju povzročitelja. Pot okužbe je fekalno-oralna, predvsem preko vode, pa tudi gospodinjstva in hrane. Pot okužbe je fekalno-oralna, predvsem preko vode, pa tudi gospodinjstva in hrane. Glavna (primarna) pot prenosa virusa je preko vode. Možna je tudi okužba s kapljicami v zraku. Dovzetnost prebivalstva je univerzalna. Prizadenejo predvsem otroci, mlajši od 14 let. Bolezen ima izrazito jesensko-zimsko sezonskost.

[ 8 ], [ 9 ], [ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ], [ 15 ]

Simptomi hepatitisa A

Inkubacijska doba se giblje od 15 do 50 dni, odvisno od kužnega odmerka virusa, vendar je v povprečju 28–30 dni. Ko virus hepatitisa A enkrat vstopi v telo, se razmnoži v regionalnih bezgavkah, prodre v kri in nato v jetrne celice ter povzroči akutni difuzni hepatitis, ki ga spremlja poškodba hepatocitov in retikuloendotelijskih elementov jeter ter zmanjšanje njihovih razstrupljevalnih in pregradnih funkcij. Poškodba hepatocitov ne nastane zaradi neposrednega delovanja virusa, temveč kot posledica imunopatoloških mehanizmov. Najbolj tipična slika hepatitisa A je akutna ikterična ciklična oblika: inkubacijska doba, prodromalno (predikterično), ikterično obdobje in okrevanje. Vendar pa se v žariščih okužbe odkrije veliko število bolnikov z anikteričnimi in asimptomatskimi oblikami okužbe, katerih število znatno prevladuje nad ikteričnimi ("fenomen ledene gore").

Imunost po okužbi je močna in dolgotrajna, povzročajo pa jo protitelesa, ki nevtralizirajo virus, in celice imunskega spomina.

Mikrobiološka diagnostika hepatitisa A

Diagnostika hepatitisa A (razen okužbe živali - šimpanzov, marmozetk, pavijanov, ki jih nimamo) temelji na različnih imunoloških metodah: RSC, imunofluorescenčna metoda, hemaglutinacija imunske adhezije (kompleks virusnega antigena + protitelesa se v prisotnosti komplementa adsorbira na eritrocite in povzroči njihovo lepljenje). Vendar so možnosti uporabe teh metod omejene zaradi pomanjkanja specifičnih virusnih antigenov, imunofluorescenčna reakcija pa zahteva biopsijo jeter, kar je nezaželeno. Metoda imunske elektronske mikroskopije je zanesljiva in specifična, vendar zelo delovno intenzivna. Zato je zaenkrat edina sprejemljiva imunološka reakcija metoda imunosorbentne analize trdne faze v obliki IFM ali RIM, zlasti pri modifikaciji "zajetja" imunoglobulinov razreda M. V naši državi je bil za ta namen predlagan testni sistem - "DIAGN-A-HEP". Načelo delovanja tega testnega sistema je naslednje. Najprej se na stene polistirenskih jamic adsorbirajo protitelesa proti imunoglobulinom razreda M (antiimunoglobulini M), nato se doda bolnikov serum, ki ga je treba testirati. Če vsebuje protitelesa IgM, se bodo ta vezala na protitelesa razreda M, nato pa se doda specifični virusni antigen (virus hepatitisa A), ki ga dobimo z gojenjem v celični kulturi. Sistem se opere in vanj dodajo protivirusna protitelesa, označena s hrenovo peroksidazo. Če vse štiri komponente sistema medsebojno delujejo, nastane štiriplastni "sendvič":

• antiimunoglobulini M,
• imunoglobulini M (proti virusu hepatitisa A - v serumu bolnika, ki ga preučujemo),
• virusni antigen,
• encimsko označena protivirusna protitelesa.

Za zaznavanje tega kompleksa se v vdolbinice doda substrat za encim. Pod vplivom encima se ta uniči in nastane barvni produkt. Intenzivnost barve se lahko kvantitativno izmeri s spektrofotometrom ali fotokolorimetrom.

Prednost metode "zajema" IgM je, da se protitelesa tega razreda imunoglobulinov pojavijo med primarnim imunskim odzivom in kažejo na aktivno fazo okužbe, po preboleni bolezni pa izginejo. Protivirusna protitelesa razreda IgG pa, nasprotno, vztrajajo še dolgo po preboleni bolezni in zagotavljajo pridobljeno imunost. Za odkrivanje virusa hepatitisa A je bila predlagana metoda DNK-sonde: kot sonda se uporablja komplementarna vRNA DNK.

Zdravljenje hepatitisa A

Ker je pri virusnem hepatitisu motena proizvodnja interferona, zdravljenje hepatitisa A temelji na uporabi interferona in induktorja njegove endogene sinteze, amiksina.

Specifično preprečevanje hepatitisa A

Prej široko uporabljena seroprofilaksa hepatitisa A z gama globulinom se ni upravičila, zato je bil glavni poudarek na izvajanju cepljenja s profilakso, izvaja se cepljenje proti hepatitisu A. V ta namen se razvijajo in že uporabljajo različne vrste cepiv. V Rusiji je bilo učinkovito cepivo proti hepatitisu A pridobljeno leta 1995 in se zdaj uspešno uporablja.