Mikroskopska analiza sputuma

Mikroskopsko opazovanje domačih in fiksnih obarvanih izpljunku osebkov omogoča podroben pregled njegovega celično strukturo, in do neke mere odraža naravo patološkega procesa v pljučih in bronhijih, njegove dejavnosti, opredeliti različne vlaknasto in kristalne tvorbe, imajo tudi pomembno diagnostično vrednost, in na koncu grobo oceno stanja mikrobna flora respiratornega trakta (bakterioskopija).

Pri mikroskopiji uporabite naravne in pobarvane priprave iz sputuma. Za študij bakterijske flore so (bris) izpljunku madeži običajno obarvamo z Romanovsky-Giemsa gram, ter za odkrivanje Mycobacterium tuberculosis, a Ziehl-Nielsen.

Celični elementi in elastična vlakna

Od celičnih elementov, ki jih lahko odkrijemo v sputumu bolnikov s pljučnico, epitelijskih celic, alveolarnih makrofagov, levkocitov in eritrocitov, so diagnostični.

Epitelne celice. Ploščatocelični epitelij nima od ustja, nazofarinksa, vokalne gube in epiglotisa diagnostične vrednosti, čeprav je odkritje številnih ploščatocelični celic, navadno kaže nizko kakovost vzorec izpljunka dostavijo v laboratorij in slina, ki vsebuje znatno nečistočami.

Pri bolnikih s pljučnico se sputum šteje za primeren za preiskavo, če z mikroskopijo z majhnim povečanjem število epitelijskih celic na področju vida ne presega 10. Večje število epitelijskih celic kaže na nesprejemljivo prevlado vsebnosti orofaringeala v biološkem vzorcu.

Alveolarni makrofagi, ki lahko v majhnih količinah, lahko najdemo prav v vsakem izpljunku so večje kletke retikulogistiotsitarnogo izvor ekscentrično, ki se nahajajo v bližini bogate vključki in jedro v citoplazmi. Ti vključki so sestavljeni iz makrofagov, ki jih absorbirajo najmanjši prašni delci (prašne celice), levkociti in podobno. Število alveolarnih makrofagov se poveča s vnetnimi procesi v pljučnem parenhimu in dihalnih poti, vključno s pljučnico.

Celice cilindričnega cilirovanega epitelija, ki obložijo sluznico grla, sapnika in bronhijev. Izgledajo kot podolgovate celice, razširjene na enem koncu, kjer se nahajajo jedro in cilia. Celice, cilindrični Cilirani epitelija dalo kateremkoli izpljunku, vendar je njihov povečan označuje poškodbo sluznici bronhijev in trahejo (akutni in kronični bronhitis, bronhiektazija, traheitis, laringitis).

Leukociti v majhnih količinah (2-5 na vidnem polju) najdemo v katerem koli sputumu. Pri vnetju pljučnega tkiva ali bronhialne sluznice in sapnika, še posebej, če je suppuration (gangrena, pljučni absces, bronhiectasis), se njihovo število znatno poveča.

Pri obarvanju preparatov za sputum po Romanovsky-Giemsi je mogoče razlikovati posamezne levkocite, ki imajo včasih pomembno diagnostično vrednost. Tako, ko je bil izražen pljučno vnetje ali bronhialne poveča sluznica tkiva kot skupno število nevtrofilcev in števila degenerativnih oblik razdrobljenosti jeder in uničenje citoplazmo.

Povečanje števila degenerativnih oblik levkocitov je najpomembnejši znak aktivnosti vnetnega procesa in hujši tečaj bolezni.

Eritrociti. Enkratne eritrocite je mogoče zaznati praktično in vsak sputum. Pri bolnikih s pljučnico, z uničenjem pljučnega ali bronhialnega tkiva, stagnacijo v majhnem krogu kroga, pljučnem infarktu itd. Opazimo znatno povečanje. Pri velikem številu rdečih krvnih celic v sputumu se odkrije med hemoptizo katere koli geneze.

Elastična vlakna. Omeniti je treba tudi o drugem član sputuma polimernih vlaken, ki se pojavljajo v izpljunku pri uničevanju pljučnem tkivu (pljučni absces, tuberkuloza, pljučni rak razgradi s sod.). Elastična vlakna so predstavljena v sputumu v obliki tanjših dvokrožnih, zlepljenih filamentov z dihotomno delitvijo na koncih. Pojav elastičnih vlaken v sputumu pri bolnikih s hudo pljučnico kaže na nastanek enega od zapletov bolezni - absces pljučnega tkiva. V nekaterih primerih lahko pri nastanku pljučnega abscesa elastična vlakna v sputumu ugotovimo celo nekoliko prej kot ustrezne radiografske spremembe.

Pogosto s krupno pljučnico, tuberkulozo, aktinomikozo, fibrinoznim bronhitisom v pripravkih za sputum lahko odkrijemo tanjša fibrinska vlakna.

Znaki aktivnega vnetnega procesa v pljučih so:

1. narava sputuma (mucopurulentna ali gnojilna);
2. povečanje števila nevtrofilcev v sputumu, vključno z njihovimi degenerativnimi oblikami;
3. povečanje števila alveolarnih makrofagov (iz posameznih skupin več celic v vidnem polju in več);

Videz v sputumu elastičnih vlaken kaže na uničenje pljučnega tkiva in tvorbo pljučnega abscesa.

Končni zaključki o prisotnosti in stopnji aktivnosti vnetja in uničenja pljučnega tkiva se oblikujejo le, če jih primerjamo s klinično sliko bolezni in rezultati drugih laboratorijskih in instrumentalnih metod preiskave.

[1], [2], [3], [4], [5]

Mikrobna flora

Mikroskopija z mikroskopom, obarvana po Gramu, in študija mikrobne flore (bakterioskopija) pri delu bolnikov s pljučnico omogoča, da se vzpostavi najverjetnejši povzročitelj pljučne okužbe. Ta enostavna metoda ekspresne diagnostike patogena ni dovolj natančna in jo je treba uporabljati le v kombinaciji z drugimi (mikrobiološkimi, imunološkimi) metodami izpita. Potopna mikroskopija obarvanih brisov je včasih zelo koristna za nujno izbiro in dajanje ustrezne antibiotične terapije. Vendar pa je treba upoštevati možnost kontaminacije bronhialne vsebine mikroflore zgornjih dihalnih poti in ustne votline, še posebej, če je zbiranje izpljujanja nepravilno.

Zato se sputum šteje za primernega za nadaljnje preiskave (bakterioskopija in mikrobiološki pregled) le, če izpolnjuje naslednje pogoje:

• Obarvanje gramov v sputumu razkriva veliko število nevtrofilcev (več kot 25 na vidnem polju z majhno povečavo mikroskopa);
• Število epitelijskih celic, bolj značilne za vsebino orofaringusa, ne presega 10;
• v pripravku prevladuje mikroorganizmi istega morfološkega tipa.

Na Gram madež sputuma v brisu je včasih dovolj, da prepoznajo gramski pnevmokokov, streptokokov, stafilokokov in gram-negativne bakterije skupino dobro -. Klebsiellu, palico Pfeiffer, E. Coli in druge gram pozitivne bakterije V tem primeru postane modro in Gram - rdeče.

Bakterijski patogeni pljučnice

Gram-pozitiven	Gram-negativni
Pneumococcus Streptococcus pneumoniae. Streptokokki Streptococcus pyogenes, Streptococcus viridans. Stafilokokki: Staphylococcus aureus, Staphylococcus haemolyticus.	Klebsiella  (Klebsiella pneumoniae) Hemophilus influenzae (Pfeiffer) Haemophilius influenzae Pseudomonas aeruginosa  (Pseudomonas aeruginosa) Legionnella (Legionella Pneumophilia) E. Coli (Escherichia coli)

Pre izpljunek bris je najlažji način preverjanja pljučnico patogenov in ima določen vrednost za izbiro optimalno terapijo z antibiotiki v. Na primer, ko zazna madežev z Gram obarvane, grompolozhitelnyh diplokokov (pnevmokoki) ali stafilokoki namesto antibiotikov širokega spektra, ki povečajo tveganje za selekcijo in razmnoževanje mikroorganizmov aitibiotikorezistentnyh mogoče dodeliti ciljno zdravljenje, učinkovite proti stafilokokom ali pnevmokokov. V drugih primerih, lahko odkrivanje dominantnih flore v razmaže po Gramu kažejo pas, ki povzroča pljučnico enterobakterije so Gram-negativne (Klebsiella, E. Coli, itd), ki je potreben ustrezen ciljni usmerjeno terapijo.

Vendar pa se lahko pogojno sklenitev verjetne povzročitelja pljučne infekcije z mikroskopijo storiti Pas temelji le znatno povečanje bakterij v izpljunku, v koncentraciji 10 ^C6 - 10 ⁷  mikrobnih celic / ml ali več (II Vishnjakova). Nizke koncentracije mikroorganizmov (<10 ³  m.ks / ml) so značilne za spremljajočo mikrofloro. Če koncentracija mikrobnih celic v območju od 10 ⁴  do 10 ⁶  mikrobnih celic / ml, to ne izključuje etiološke vloge tega mikroorganizma v nastanku pljučne infekcije, vendar ga ne izkaže.

Prav tako je treba opozoriti, da "atipični" intracelularni patogeni (mikoplazma,  legionela, klamidija, rickettsia) ne obarvajo Gramma. V teh primerih se lahko pojavi sum, da ima "atipična" okužba, če raztrgane kažejo razgradnjo med velikim številom nevtrofilcev in izredno majhnim številom mikrobnih celic.

Na žalost, je postopek označen z mikroskopijo in na splošno precej nizki občutljivosti in specifičnosti. Ne napovedno vrednost tudi proti so pnevmokoki dobro opravljene komaj doseže 50%. To pomeni, da v polovici primerov metoda daje lažne pozitivne rezultate. Razlog za to je več razlogov, med katerimi je dejstvo, da je približno 1/3 bolnikov pred bolnišnico so prejeli antibiotike, ki močno zmanjšuje učinkovitost izpljunku brisa. Nadalje, tudi v primeru pozitivnih rezultatov študije, kar kaže na dovolj visoko koncentracijo na brisa "tipični" bakterijski patogeni (npr pnevmokokno), ne more popolnoma izključiti prisotnost hkratne okužbe "atipičnih" znotrajceličnih patogeni (Mycoplasma, Chlamydia, Legionella).

Metoda bakterioskopije sputumskih madežev, ki jih obarva Gram, v nekaterih primerih pomaga preverjati povzročitelja pljučnice, čeprav ima na splošno zelo nizko napovedno vrednost. "atipične" znotrajceličnih patogeni (Mycoplasma, Legionella, klamidijo, rikecije) niso preverjeni z mikroskopijo, ker ni Gram madežev.

Omeniti je treba možnost mikroskopske diagnoze pri bolnikih s pljučnico glivične okužbe pljuč. Najbolj pomembna za bolnike, ki so dolgotrajno zdravljenje z antibiotikom širokega spektra, je odkrivanje nativne ali mikroskopijo obarvajo sputuma Candida albicans v obliki kvasnih celic in razvejanosti micelija. Prikazujejo spremembo mikroflore traheobronhialne vsebine, ki se pojavi pod vplivom antibiotičnega zdravljenja, kar zahteva znaten popravek zdravljenja.

V nekaterih primerih pri bolnikih s pljučnico je treba razlikovati obstoječo pljučno bolezen s tuberkulozo. V ta namen uporabite barvo bris Ziehl-Nielsen, ki je v nekaterih primerih omogoča identifikacijo Mycobacterium tuberculosis, vendar negativen rezultat te preiskave ne pomeni pomanjkanje bolnikov s tuberkulozo. Ko obarvanje pljuč po Tsil-Nielsen, je mikobakterijska tuberkuloza rdeče barve, vsi drugi elementi v pljučih pa so modri. Tuberkulozne mikobakterije imajo videz iztrebkov, ravnih ali nekoliko ukrivljenih palic različnih dolžin z ločenimi zgoščanji. Nahajajo se v pripravi v skupinah ali posamično. Diagnostična vrednost je odkrivanje pri pripravi enojne mikobakterijske tuberkuloze.

Za povečanje učinkovitosti mikroskopskega odkrivanja tuberkuloze mikobakterij uporabite številne dodatne metode. Najpogostejši od teh je tako imenovano metodo flotacija, pri kateri homogeniziramo v izpljunku stresali s toluen, ksilen ali benzen, ki pade, na površino zajemanje mikobakterije. Po poravnavi sputuma se zgornji sloj pipetira na drsnik. Potem je zdravilo Tsilyu-Nielsen pritrjeno in olupljeno. Obstajajo tudi drugi načini shranjevanja (elektroforezo) in tuberkuloza bakterij mikroskopijo (fluorescenčno mikroskopijo).

Mikroskopski pregled (analiza) sluzi omogoča odkrivanje sluzi, celičnih elementov, vlaknatih in kristalnih formacij, gliv, bakterij in parazitov.

Celice

• Alveolarni makrofagi so celice retikulogistocitnega izvora. Veliko število makrofagov v sputumu je odkrito v kroničnih procesih in v fazi razreševanja akutnih procesov v bronhopulmonalnem sistemu. Alveolarne makrofage, ki vsebujejo hemosiderin ("celice srčnih okvar"), se odkrijejo z blago infarktom, krvavitvijo, stagnacijo v majhnem krogu kroga. Makrofagi z lipidnimi kapljicami so znaki ovira pri bronhih in bronhioholih.
• Ksantomske celice (maščobne makrofage) se nahajajo v abscesu, aktinomikozi, ehinokokozi pljuč.
• Celice cilindričnega cilirovanega epitelija so celice sluznice grla, sapnika in bronhijev; jih najdemo v bronhitisu, traheitisu, bronhialni astmi, malignih novotvorbah pljuč.
• Ploski epitel zaznava, ko pljuska vstopi v sputum, nima diagnostičnega pomena.
• Leukociti v eni ali drugi količini so prisotni v katerem koli izpljunku. Veliko število nevtrofilcev je odkritih v sluzničnem in gnojnem sputumu. Eozinofili so bogati s sputumom pri bronhialni astmi, eozinofilni pljučnici, glotisovi pljučni leziji in pljučni infarkt. Eozinofili se lahko pojavijo v sputumu za tuberkulozo in pljučni rak. Limfociti v velikem številu najdemo v velikem kašlju in, bolj redko, s tuberkulozo.
• Eritrociti. Odkrivanje posameznih rdečih krvnih celic v sputumu ni diagnostično. Če je v sputumu prisotna sveža kri, se določijo nespremenjeni eritrociti, vendar če krv, ki je v dihalnem traktu dolgo časa pušča s sputumom, se odkrijejo izprane rdeče krvne celice.
• Celice malignih tumorjev najdemo v malignih novotvorbah.

Vlakna

• Elastična vlakna se pojavijo v razpadu pljučnega tkiva, ki ga spremlja uničenje epitelne plasti in sproščanje elastičnih vlaken; najdemo jih pri tuberkulozi, abscesu, ehinokokozi, neoplazmih v pljučih.
• Koronalna vlakna se odkrijejo pri kroničnih pljučnih boleznih, kot je kavernoza tuberkuloza.
• Kalcinirana elastična vlakna so elastična vlakna, impregnirana s kalcijevimi solmi. Odkrivanje le-teh v sputumu je značilno za razgradnjo tuberkularnega petrikitisa.

Spirale, kristali

• Spirale Kurshmana se oblikujejo v spastićnem stanju bronhijev in prisotnost sluzi v njih. Med potekom kašlja se viskozna sluz spusti v lumen večjega bronhusa, ki se vrti v spiralo. Spirale Kurshman se pojavljajo z bronhialno astmo, bronhitisom, pljučnimi tumorji, stiskanjem bronhijev.
• Kristali Charcot-Leiden so produkti razpadanja eozinofilov. Običajno se pojavijo v sputumu, ki vsebuje eozinofile; so značilne za bronhialno astmo, alergične razmere, eozinofilne infiltrate v pljučih, pljučne spremembe.
• Kristali holesterola se pojavljajo z abscesom, pljučno ehinokokozo, neoplazmi v pljučih.
• Kristali hematoidina so značilni za absces in gangreno pljuč.
• Pri aktinomikozah pljuč so odkriti napadi aktinomicete.
• Elementi ehinokokija se pojavljajo z ehinokokozo pljuč.
• Trupi Dietrich - krpice rumenkasto-sive barve, ki imajo neprijeten vonj. Sestavljajo jih detritus, bakterije, maščobne kisline, kapljice maščob. Značilne so za abscis pljuč in bronhiektaz.
• Ehrlichov tetrad je sestavljen iz štirih elementov: kalciniranega detritusa, kalcificiranih elastičnih vlaken, kristalov holesterola in mikobakterijske tuberkuloze. Pojavi se v razpadu kalcificiranega primarnega tuberkularnega ostrine.

Mikelija in plodne glivične celice se pojavljajo v glivičnih lezijah bronhopulmonalnega sistema.

Pneumocystis se pojavi pri pljučnici pneumociste.

Sferule gliv se odkrijejo pri kokcidioidomikozah pljuč.

Ascaridne ličinke se odkrijejo z ascariazo.

Ličinke črevesne ugristike so opredeljene z močnoloidiazo.

Jajca pljučne sipke identificiramo s paragonimozo.

Elementi, ki jih najdemo v sputumu pri bronhialni astmi. Kadar bronhialno astmo navadno ločuje majhna količina sluznega, viskoznega sputuma. Makroskopsko lahko vidite spiralo Kurshman. Ko je mikroskopska raziskava značilna za prisotnost eozinofilov, cilindričnega epitelija, obstajajo kristali Charcot-Leiden.