Imunološke raziskave v urologiji

Dodelitev imunograma urološkemu pacientu pomeni, da zdravnik, ki se zdravi, predpostavlja prisotnost motenj v imunskem sistemu. Duplikat bakterijskih, virusnih, glivičnih okužb, alergične reakcije, lahko sistemske bolezni simptomi teh motenj, ki so značilni številni sindromi (okužbe, rak, alergijska motnja, avtoimunska bolezen, limfoproliferativne). En bolnik ima lahko več sindromov. Na primer, lahko kronične infekcijske bolezni (infekcijska sindrom) povzroči imunske pomanjkljivosti in imunska pomanjkljivost se lahko pokažejo predispozicije za infekcijske bolezni in raka (rak sindrom). Predoziranje okužb se lahko pojavi v ozadju sekundarne imunske pomanjkljivosti, ki se je razvila kot posledica limfoproliferativne bolezni, na primer levkemije. V imunskem sistemu obstajajo tri glavne skupine patoloških sprememb:

• kvantitativno ali funkcionalno pomanjkanje ene ali druge povezave imunosti, ki vodi k razvoju stanja imunske pomanjkljivosti;
• kršitev pri prepoznavanju antigena imunskega sistema, ki vodi do razvoja avtoimunskih procesov;
• hiperreaktivnega ali "pervertiranega" imunskega odziva, ki se kaže v razvoju alergijskih bolezni.

Obstajajo presejalni testi (preizkusi stopnje 1) in kvalifikacijski (preizkusi 2-stopenjske) metode imunodiagnostike. Prvi obstajajo za odpravljanje kršitev v imunskem sistemu, slednje - za vzpostavitev mehanizmov, ki so vključeni v njihovo izvajanje, z namenom nadaljnje imunokorekcije.

B-Celična povezava imunosti

Presejalne metode

• Določitev relativnega in absolutnega števila limfocitov B preko imunofluorescenco ali pretočno citometrijo z uporabo monoklonskih protiteles proti antigenom B-celic (CD19, CD20, kjer CD - označevalec pripadnosti). Vsebnost B-limfocitov je pri odraslih normalna: 8-19% celotnega števila levkocitov ali 190-380 celic / μl. Povečevanje vsebnosti B limfocitov pojavi pri akutnih in kroničnih bakterijskih in glivičnih okužb, kronične jetrne bolezni, sistemske bolezni vezivnega tkiva, kronična limfocitna levkemija, multipli mielom.
• Določitev koncentracije imunoglobulinov nespespetsificheskih (F, M, G, e) z eno samo radialno imunodifuzije ali turbometrii nephelometry, radioimuno ali encimskim imunotestom (EIA). Norme za odrasle: imunoglobulin (Ig) 0,9-4,5 g / l. IgM 03-3,7 g / l. IgG 8,0-17 g / l. Povečanje koncentracije imunoglobulinov se pojavi z enakimi patološkimi stanji, v katerih se pojavi povečanje vsebnosti limfocitov B. Zmanjšanje koncentracije imunoglobulinov v prirojeno hipogamaglobulinemijo, tumorji imunskega sistema, odstranitev vranice, izguba proteina, pri boleznih ledvic ali črevesja, zdravljenje s citostatiki in immunodepreesantami.

Določanje metod

• Določanje kirurških imunskih kompleksov v krvi s selektivnimi precipitacijami v polisilen glikolu, ki jim sledi test spektrofotometrične gostote (normalno 80-20 UE). Povečana obtoku imunskih kompleksov je značilno za akutno bakterijskih, glivičnih, virusnih infekcij, avtoimunskih, immunocomplex bolezni, serumske bolezni, alergijske reakcije tipa 3;
• Določanje specifičnih imunoglobulinov v krvi v zvezi s bakterijskih in virusnih antigenov, deoksiribonukleinska kislina (DNA) v avtoimune bolezni, identifikacija sperme (avtoimunska neplodnosti) in protivopochechnyh protiteles (pielonefritis in glomerulonefritis) z radialno imunodifuzije ali ELISA.
• Določanje antisperme protiteles v spermi [MAR-test (mešana antiglobulin reakcija)], norma je negativna.
• Določitev koncentracije imunoglobulinov v urinu z namenom razločevanje med pielonefritis in glomerulonefritis (proteinurija selektivnost).
• Določitev IgE v prostatičnem soku za diagnozo alergijskega prostatitisa z radialno imunodifuzijo ali ELISA. 
• Raziskave na odzivni blasttransformation reakcijo limfocitov B o B-celični mitogen a (pokeweed mitogen za stimulacijo blasttransformation reakcijo B-limfocitov v prisotnosti limfocitov T), kjer je standardna vrednost 95-100%.

T-celična povezava imunosti

Presejalne metode

• Določitev relativnega in absolutnega števila zrel CD3 T limfocitov reakcijo z imunofluorescenco ali pretoka citofluorometrijo z uporabo anti-SDZ monoklonska protitelesa. Odrasli 58-76%, ali 1100-1700 celic / ml. Zmanjšanje števila T-limfocitov indikator okvare celične imunosti. To je značilno za več sekundarnih in primarnih imunsko pomanjkljivostjo (kronične bakterijske in virusne okužbe: tuberkuloza, sindrom pridobljene imunske pomanjkljivosti, rak, kronična ledvična odpoved, poškodba, stres, staranje, podhranjenost, zdravljenje z citotoksičnih zdravil, ionizirajočim sevanjem). Povečanje števila limfocitov T je v ozadju imunskega hiperaktivnosti ali limfoproliferativne bolezni. Ko se vnetje števila limfocitov T najprej dvigne in nato spusti. Nespremenjeno limfocitov T kaže kronično vnetje.
• Ocena subpopulacij limfocitov.
  • Določitev števila T-pomagačev (protiteles proti CD4). Običajno je 36-55% ali 400-1100 celic / μl. Povečanje števila teh celic pojavlja v avtoimunske bolezni, Waldenstromovo bolezen, imunske aktivacija antitransplantatsionnogo; Zmanjšanje števila T-celice pomagalke se pojavlja pri kroničnih bakterijskih, virusnih, protozojskih infekcije, tuberkuloza, sindrom pridobljene imunske pomanjkljivosti, raka, opekline, poškodbe podhranjenost, staranje, citostatiki zdravljenje, ionizirajočim sevanjem.
  • Določitev števila T-supresorjev (protiteles proti CD4). Običajno 17-37% ali 300-700 celic / μl. Povečanje števila T-supresorjev se pojavlja pri enakih pogojih, v katerih se število T-pomožnih snovi zmanjšuje, njihovo zmanjšanje pa pri enakih pogojih, ko se poveča vsebnost T-pomagačev.
  • Imunoregulatorni indeks CD4 / CD8, v normi 1,5-2,5. Hiperaktivnost s hitrostjo več kot 2,5 (alergične in avtoimunske bolezni); hipoaktivnost - manj kot 1,0 (predispozicija kroničnim okužbam). Ob nastopu vnetnega procesa se zvišuje imunoregulatorni indeks in se ob normalizaciji normalizira.

Določanje metod

• Določitev števila naravnih morilcev (NK celic) - anti-CD16 in anti-CD56-protiteles. Norma za CD 16-limfocite je 6-26%, CD56 - 9-19%. Povečanje števila NK-celic pojavi pri zavrnitvi presadka, zmanjša - pri virusnih infekcij, raka, primarnih in sekundarnih imunsko pomanjkljivostjo, opeklin, travme in stresa, zdravljenje s citostatiki in ionizirajočim sevanjem. 
• Določitev števila T-limfocitov s receptorjem za interlevkin-2 (aktivacijski marker) - protitelesa proti CD25. Norma je 10-15%. So opazili povečanje njihovega števila v alergičnih bolezni, zavrnitve presadka, kot odziv na timusno odvisne antigene med akutno primarne okužbe, zmanjšanje - pod enakimi bolezni, ki vključujejo zmanjšanje števila NK celic.
• Pregled ekspresije aktivacijskega označevalca - molekula histokompatibilnosti razreda II HLA-DR. Povečana ekspresija se pojavi pri vnetnih procesih pri bolnikih s hepatitisom C, celiakijo, sifilisom, akutnimi respiratornimi infekcijami.
• Vrednotenje apoptoze limfocitov. Navedba pripravljenosti limfocitov apoptoze lahko označene z njihovo izražanje površinskega Fas-receptor (CD95) v mitohondrijih in BD-2 protoonkogena. Apoptoza je bila ocenjena z obdelavo limfocitov dve fluorescentni barvila: propidijevim jodidom, ki se veže na DNA fragmentov in aneksina Y, vezavo na fosfatidilserina na celično membrano pojavljajo v začetku apoptozo. Vrednotenje rezultatov poteka na pretočnem citofluorimetru. Izračun rezultatov temelji na razmerju med celicami, obarvanimi z različnimi barvili. Neobarvano celice živih celic, povezane samo s aneksina Y, - zgodnje znake apoptoze, s propidijevim jodida in vezave aneksin I - pozno manifestacije apoptoze, ki obarvajo samo propidium jodid kaže nekrozo.
• Vrednotenje proliferacije T-limfocitov in vitro.
  • Sprememba v blastogenezi celic je reakcija pretvorbe limfocitov. Leukociti inkubiramo z vsemi mitogen rastlinskega izvora (lektini). Pogosteje uporabljamo phytohemagglutinin za 72 ur, nato pa ga razrežemo, ga madežemo in računamo število blastov! Indeks stimulacije je razmerje med odstotkom preoblikovanih celic v eksperimentu (kultura s fitohemaglutininom) in odstotek transformiranih celic v kontroli (kultura brez fitohemaglutinina). Reakcijsko limfocitov preoblikovanja blast lahko ovrednotimo za vključitev v kultivirane celice radioaktivnega markerja (SH timndin), saj je delitev celic poveča sintezo DNA. Motnje proliferativnega odziva se pojavljajo pri primarni in sekundarni imunodeficienci, povezani z okužbami, onkološkimi boleznimi, ledvično insuficienco in kirurškimi posegi.
  • Vrednotenje teh študijah izražanje aktivacijskih označevalcev (CD25, transferinskega receptorja do - CD71) molekul in MHC razreda II HLA-DR, ki so v bistvu odsoten počivajočih T-limfocitov. T limfociti stimulirali z phytohemagglutinin potem ko so 3 dni izrazom aktivacijo označevalci analiziramo z direktno ali indirektno imunofluorescenco, pretočno citometrijo z uporabo monoklonskih protiteles izločajo receptorje.
  • Merjenje količine mediatorjev z aktiviranih limfocitih T [interlevkin (IL) 2, IL-4, IL-5, IL-6, gama-interferon, itd] ter radioimuno ali ELISA sintetiziranega. Posebno pomembna je ocena koncentracija y-interferona in IL-4 obeh nasprotnih označevalniki Th2 in supernatanta kulture in aktivira znotrajcelično. Če je le možno, je koristen za določitev izražanje gena za zadevno citokin po stopnji sel ribonukleinske kisline v treonin proizvajajo intenzivnosti celic in ekspresijskih receptorja za ustreznih citokinov.
    
• Reakcija zaviranja migracije limfocitov. Preobčutljivi T-limfociti v reakciji z limfokini sproščanja antigena, vključno s faktorji. Zaviranje migracije limfocitov. Pojav inhibicije opazimo, ko mitogene uvajamo v kulturo celic. Vrednotenje stopnje inhibicije omogoča oceno sposobnosti limfocitov za sproščanje citokinov. Običajno je frekvenca migracije, odvisno od specifičnega mitogena, 20-80%.
• Vrednotenje citotoksičnosti NK celic. Določite sposobnost celic naravnega morilca, da ubijejo ciljne celice eritromioeloidne črte K-562. Če se oceni citotoksičnost, odvisna od protiteles, se uporabijo tarčne celice, prevlečene s protitelesi IgG. Ciljne celice so označene s 3H-uridinom in inkubirane z efektorskimi celicami. Smrt ciljnih celic se ocenjuje iz sproščanja radioaktivne etikete v raztopino. Zmanjšanje citotoksičnosti nastane z malignimi novotvorbami. V nekaterih primerih, ko je potrebna napoved učinkovitosti zdravljenja z interlevkini, se citotoksičnost celic NK oceni, ko je inkubirana z določenimi citokini.

Preiskava funkcije fagocitov

Presejalne metode

Absorpcija intenzivnost fagocitov Študija mikrobnih celic (fagocitozo delcev lateksa, testne kulture aureus, Escherichia coli, ali mikroorganizmov, izoliranih iz pacienta). Po centrifugiranju heparinom levkocitov vrniti brozgo dodamo seruma IV krvi za opsonization (opsonins - proteini, ki povečujejo fagocitozo). Mikrobni suspenzijo razredčimo, pomešamo z levkociti in inkubirali 120 min, jemanje vzorcev za analizo hrbet 30.90.120 minut po začetku inkubacije. Iz izbranih suspenzij levkocitov naredimo brise. Določite naslednje kazalnike fagocitoze:

• fagocitični indeks - odstotek celic, ki so vstopile v fagocitozo v 30 min in 120 min inkubacije; normativna vrednost fagocitnega indeksa (30) 94% fagocitnega indeksa (120) - 92%;
• fagocitna številka - povprečno število intracelularnih bakterij; normativna vrednost fagocitnega števila (30) 11%, fagocitna številka (120) - 9,8%;  
• koeficient fagocitnega števila - razmerje fagocitnega števila (30) do fagocitnega števila (120); običajno 1,16;
• baktericidni indeks nevtrofilcev je razmerje med številom mikrobov, ubitih v fagocitih, na skupno število prevzetih mikrobov; v normi 66%.

Določanje metod

• Preiskava baktericidne aktivnosti fagocitov pri testu z nitrozin tetrazolijem (NST) je test NST. Za levkocite dodamo barvilo dušikovega tetrazolijevega rumenega. Ko se nevtrofil absorbira barve, se postopek redukcije izvaja pod delovanjem prostih radikalov kisika, kar ima za posledico modro obarvanje. Reakcijo izvedemo v plošči s ploščato dnom z 96 vrtinami. V prvih treh vdolbinicah z zmesjo HCT in levkocitov dodamo raztopino Hanks (spontano HCT), v slednjih - delce lateksa; inkubiramo pri 37 ° C 25 minut. Rezultati se berejo pri 540 nm na bralcu in izraženi v konvencionalnih enotah. Izračunajte stimulacijski faktor (K _st ), ki je enak razmerju optične gostote v stimuliranih vrtinah do povprečne optične gostote v vdolbinicah brez stimulacije. Pri zdravih ljudeh, _{HCT sponta} = 90 ± 45 UE, NST _Stim = 140 ± 60 UE. K _st = 1,78 ± 0,36.
• Preiskava adhezijskih molekul. S pomočjo pretočne citofluorimetrije se določi izražanje površinskih antigenov CD11a / CD18, CD11b / CD18, CD11c / CD18. Imunodeficience s kršenjem adhezije se kažejo z relapsirajočimi okužbami, počasno celjenje ran in odsotnost gnoj v žariščih okužbe.

Preiskava sistema komplementa

Presejalne metode

Določanje hemolitične aktivnosti komplementa - študija klasične poti aktivacije komplementa. Različne razredčine seruma pacienta in zdrava oseba se doda eritrocitom ovna, prekritega s protitelesi. Enota hemolitične aktivnosti je vzeta kot inverzna za redčenje seruma, v katerem se uniči 50% eritrocitov. Stopnjo hemolize ocenjujemo fotometrično z donosom hemoglobina v raztopini. Zmanjšanje hemolitične aktivnosti komplementa opazimo pri sistemskem lupus eritematozusu z vključitvijo ledvic, akutnim glomerulonefritisom. Kombinirane imunske pomanjkljivosti, miastenija gravis, virusni hepatitis, limfomi, povečanje - z obstruktivno zlatenico, tiroiditis Hashimoto. Revmatizem, revmatoidni artritis, nodularni periarteritis. Dermatomiozitis, miokardni infarkt, ulcerativni kolitis, Reiterjev sindrom, protin.

Določanje metod

• Določanje komponent komplementa. Kvantitativno določanje se izvede z metodo radialne imunodifuzije in nepelometrije.
  Študija ni informativna, razen če se spremenijo antigenske lastnosti komplementarnih komponent.
• Ugotovljeno je bilo, da Clq-komponenta komplementa izboljša fagocitozo in posreduje celično citotoksičnost. Njegovo zmanjšanje se pojavlja pri boleznih imunskih kompleksov, sistemskega eritematoznega lupusa, purulentnih okužb in tumorjev.
• C3-komponenta sodeluje pri aktiviranju klasične in alternativne poti komplementa. Zmanjšanje njegove koncentracije je povezano s kroničnimi bakterijskimi in glivičnimi okužbami, prisotnostjo kirurških ali tkivnih imunskih kompleksov.
• Komponenta C4 sodeluje pri aktiviranju klasične poti. Zmanjšanje njegove koncentracije je povezano s podaljšanim aktiviranjem komplementa z imunskimi kompleksi in z zmanjšanjem koncentracije inhibitorja C1, ki nadzira aktivacijo klasične poti komplementa. Pomanjkljivost C4 je sistemski lupus eritematozus, C4 povečan pojavi posledica ledvične bolezni, zavrnitve presadka, akutno vnetje, bolezni gastrointestinalnega trakta.
• C5a je majhen fragment molekule C5, ki se od nje oddaljuje zaradi aktivacije sistema komplementa. Povečanje koncentracije se pojavi pri vnetju, sepsi, atopičnih in alergijskih boleznih.
• Cl-inhibitor je večnamenski faktor. Nadzoruje aktivacijo komponente C1 v komplementu, zavira aktivnost kalikreina, plazmina in aktiviranega faktorja Hageman, proteaze Cls in Or. Pomanjkanje inhibitorja C1 vodi v angioedem.
• dopolnilne študije. Standardnemu serumu, ki nima komplementarne komponente, se doda testni serum in določi hemolitična aktivnost komplementa. Če se hemolitična aktivnost ne povrne v normalno stanje, se domneva, da se aktivnost te komponente komplementa v testnem serumu zmanjša.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]