Konfokalna intravitalna mikroskopija roženice

Konfokalna mikroskopija roženice je ena od sodobnih metod preiskovanja; omogoča izvajanje intravitalnega spremljanja roženice z vizualizacijo tkiv na celični in mikrostrukturni ravni.

Ta metoda je zaradi prvotne zasnove mikroskopa in njegove visoke ločljivosti omogočila vizualizacijo živih tkiv roženice, merjenje debeline vsake njene plasti in oceno stopnje morfoloških motenj.

Namen konfokalne mikroskopije roženice

Označite morfološke spremembe roženice, ki izhajajo iz različnih vnetnih in distrofičnih bolezni, kot tudi iz kirurških posegov in učinkov CR.

Morfološki podatki so potrebni za oceno resnosti patološkega procesa, učinkovitosti zdravljenja in določitvi taktike obvladovanja bolnikov.

Indikacije za postopek

• Vnetne bolezni roženice ( keratitis ).
• Distrofične bolezni roženice ( keratokonus, Fuchsova distrofija itd.).
• Sindrom "suha oko".
• Pogoji po kirurških posegih na roženici (prek presaditve roženice, keratorefraktivnih operacij).
• Pogoji, povezani z nošenjem kontaktnih leč.

[1], [2], [3], [4]

Priprava

Ta študija je možna brez uporabe anestetikov. Kapljica potopne tekočine se postavi na objektiv mikroskopske leče. S tem se odpravi neposreden stik leče z roženico in zmanjša tveganje za epitelno poškodbo.

[5], [6], [7], [8], [9],

Tehnika konfokalna mikroskopija roženice

Študija se izvaja na konfokalnem mikroskopu ConfoScan 4 (Nider) s povečanjem 500-krat. Naprava vam omogoča pregled roženice v celotni debelini.

Velikost preiskovanega območja je 440 × 330 μm, debelina skenirne plasti 5 μm. Na rožnino se prinese leča s kapljico gela, ki se dotika in nastavi tako, da je debelina sloja potopne tekočine 2 mm. Zasnova naprave vam omogoča pregled roženice v osrednjem območju in njegovih paracentralnih območjih.

Kontraindikacije za postopek

Relativna kontraindikacija je zaznala draženje očesa v ozadju akutnega vnetnega procesa.

[10], [11]

Normalna učinkovitost

Normalna morfološka slika roženice

Anteriorni epitel je sestavljen iz 5-6 slojev celic. Povprečna debelina celotnega epitelija je približno 50 μm. Glede na morfološko strukturo se razlikujejo (od znotraj navzven): bazalni, podlage in površinski.

• Notranji (bazalni) sloj predstavljajo majhne gosto valjaste celice brez vidnega jedra. Meje bazalnih celic so jasne in svetle.
• Srednji sloj je sestavljen iz 2-3 sloja hrbtenice (krilatih) celic z globokimi invaginacijami, v katere se gradijo izrastki sosednjih celic. Mikroskopsko, mejne celice so dokaj dobro razpoznavne in jedro morda ni mogoče definirati ali biti mehko.
• Površinski sloj epitelija predstavlja eno ali dve plasti poligonalnih celic z jasnimi mejami in homogeno gostoto. Jedro so ponavadi svetlejše od citoplazme, v kateri se lahko razlikuje tudi skoraj nukleusni temni obroč.

Med celicami površinske plasti razlikujemo med temno in svetlobo. Povečana odbojnost epitelijskih celic kaže na zmanjšanje stopnje presnove v njih in začetek njihove deskvamacije.

Bowmanova membrana je prozorna struktura, ki ne odraža svetlobe, zato je nemogoče vizualizirati, ko se izvaja konfokalna mikroskopija.

Podbazni živčni pleksus se nahaja pod Bowmanovo membrano. Običajno živčna vlakna izgledajo kot svetli trakovi, ki potekajo vzporedno na temnem ozadju in se med seboj dotikajo. Odsevnost (odsevnost) je lahko dolga vlakna neenakomerna.

Strom roženice zavzema 80 do 90% debeline roženice in je sestavljena iz celične in zunajcelične komponente. Osnovni celični elementi stroma so keratociti; predstavljajo približno 5% prostornine.

Tipični mikroskopski vzorec stroma vključuje več svetlih nepravilnih ovalnih oblik (jeder keratocitov), ki ležijo v debelini prozorne temno sive ali črne matrice. Običajno je vizualizacija zunajceličnih struktur zaradi njihove preglednosti nemogoča. Stromo je mogoče pogojno razdeliti na podlage: anterior (ki se nahaja neposredno pod Bowmanovo membrano in predstavlja 10% debeline stroma), sprednji, srednji in zadnji.

Povprečna gostota keratocitov je v anteriorni stemi večja, postopoma pa se njihovo število zmanjšuje proti zadnjim slojem. Gostota Sprednji stromalne celične skoraj dvakrat večja od zadnjih stromalnih celic (če je gostota celic sprednjega strome delo kot 100%, nato gostote zadaj približno 53,7% celic). V anteriorni stromi imajo jedro keratocitov okroglo fižolasto obliko, v zadnjem ovalnem in bolj podolgovatem.

Jaredi keratocitov se lahko razlikujejo glede na svetlost. Različna sposobnost refleksije svetlobe je odvisna od njihovega presnovnega stanja. Šibke celice štejejo za aktivirane keratocite ("stresne celice"), katerih dejavnosti so usmerjene v vzdrževanje notranje homeoze roženice. V normi in vidnem polju obstajajo ene aktivirane celice.

Nervna vlakna v sprednji steni roženice so vizualizirana kot svetle homogene trakice, ki pogosto tvorijo bifurkacije.

Desemetna membrana je navadno prozorna in se ne zazna s konfokalno mikroskopijo.

Zadnji epitel je monosloj iz šestokotnih ali poligonalnih ravnih celic z enakomerno lahkotno površino ob ozadju različnih temnih mejnih celic.

Naprava omogoča možnost ročnega ali avtomatskega izračuna gostote celic, njihove površine in koeficienta variabilnosti.

Patološke spremembe v strukturi roženice

Keratokonus zaznamujejo pomembne spremembe v anteriornem epiteliju in steni roženice.

[12], [13], [14], [15], [16], [17], [18], [19], [20]