Konfokalna mikroskopija roženice z življenjsko dobo

Konfokalna mikroskopija roženice je ena od sodobnih raziskovalnih metod, ki omogoča intravitalno spremljanje roženice z vizualizacijo tkiva na celični in mikrostrukturni ravni.

Ta metoda zaradi originalne zasnove mikroskopa in visoke ločljivosti omogoča vizualizacijo živega tkiva roženice, merjenje debeline vsake od njegovih plasti in oceno stopnje morfoloških motenj.

Namen konfokalne mikroskopije roženice

Okarakterizirati morfološke spremembe roženice, ki se pojavljajo pri različnih vnetnih in distrofičnih boleznih, pa tudi kot posledica kirurških posegov in izpostavljenosti CL.

Podatki morfološkega pregleda so potrebni za oceno resnosti patološkega procesa, učinkovitosti zdravljenja in za določitev taktike vodenja bolnika.

Indikacije za postopek

• Vnetne bolezni roženice ( keratitis ).
• Distrofične bolezni roženice ( keratokonus, Fuchsova distrofija itd.).
• Sindrom suhega očesa.
• Stanja po kirurških posegih na roženici (penetrirajoča presaditev roženice, keratorefraktivne operacije).
• Stanja, povezana z nošenjem kontaktnih leč.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]

Priprava

Ta pregled se lahko izvede brez uporabe anestetikov. Na objektiv konfokalnega mikroskopa se nanese kapljica imerzijske tekočine. To odpravi neposreden stik leče z roženico in zmanjša tveganje za poškodbo epitelija.

[ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]

Tehnika konfokalna mikroskopija roženice

Študija se izvaja s konfokalnim mikroskopom ConfoScan 4 (Nider) s 500-kratno povečavo. Naprava omogoča pregled roženice po celotni debelini.

Velikost pregledanega območja je 440 × 330 μm, debelina skenirajoče plasti je 5 μm. Leča s kapljico gela se približa roženici, dokler se je ne dotakne, in je nameščena tako, da je debelina plasti imerzijske tekočine 2 mm. Zasnova naprave omogoča pregled roženice v osrednjem območju in njenih paracentralnih območjih.

Kontraindikacije za postopek

Relativna kontraindikacija je hudo draženje oči zaradi akutnega vnetnega procesa.

[ 10 ], [ 11 ]

Normalna učinkovitost

Normalna morfološka slika roženice

Sprednji epitelij je sestavljen iz 5-6 plasti celic. Povprečna debelina celotnega epitelija je približno 50 µm. Glede na morfološko strukturo ločimo naslednje plasti (od znotraj navzven): bazalne, šilaste celice in površinske.

• Najgloblja (bazalna) plast je predstavljena z majhnimi, gostimi, valjastimi celicami brez vidnega jedra. Meje bazalnih celic so jasne in svetle.
• Srednja plast je sestavljena iz 2-3 plasti bodičastih (krilatih) celic z globokimi vdolbinami, v katere so vdelani izrastki sosednjih celic. Mikroskopsko so meje celic precej jasno razločljive, jedra pa morda niso definirana ali pa so nejasna.
• Površinsko plast epitelija predstavlja ena ali dve plasti poligonalnih celic z jasnimi mejami in homogeno gostoto. Jedra so običajno svetlejša od citoplazme, v kateri je mogoče razločiti tudi perinuklearni temen obroč.

Med celicami površinske plasti ločimo temne in svetle celice. Povečana odbojnost epitelijskih celic kaže na zmanjšanje njihove presnove in začetek luščenja.

Bowmanova membrana je prozorna struktura, ki ne odbija svetlobe, zato jo je običajno nemogoče vizualizirati s konfokalno mikroskopijo.

Subbazalni živčni pletež se nahaja pod Bowmanovo membrano. Običajno so živčna vlakna videti kot svetle črte, ki potekajo vzporedno na temnem ozadju in se dotikajo druga druge. Odbojnost (refleksivnost) je lahko vzdolž vlakna neenakomerna.

Stroma roženice zavzema od 80 do 90 % debeline roženice in je sestavljena iz celičnih in zunajceličnih komponent. Glavni celični elementi strome so keratociti; predstavljajo približno 5 % volumna.

Tipična mikroskopska slika strome vključuje več svetlih nepravilnih ovalnih teles (jeder keratocitov), ki ležijo v debelini prozorne temno sive ali črne matrice. Običajno vizualizacija zunajceličnih struktur ni mogoča zaradi njihove prosojnosti. Stromo lahko pogojno razdelimo na podplasti: sprednjo (nahaja se neposredno pod Bowmanovo membrano in predstavlja 10 % debeline strome), sprednjo-srednjo, srednjo in zadnjo.

Povprečna gostota keratocitov je višja v sprednji stromi in se postopoma zmanjšuje proti zadnjim plastem. Gostota sprednjih stromalnih celic je skoraj dvakrat višja od gostote zadnjih stromalnih celic (če gostoto sprednjih stromalnih celic vzamemo za 100 %, bo gostota zadnjih stromalnih celic približno 53,7 %). V sprednji stromi imajo jedra keratocitov zaobljeno fižolasto obliko, medtem ko so v zadnji stromi ovalna in bolj podolgovata.

Jedra keratocitov se lahko razlikujejo po svetlosti. Različna sposobnost odbijanja svetlobe je odvisna od njihovega presnovnega stanja. Svetlejše celice veljajo za aktivirane keratocite ("stresne" celice), katerih aktivnost je usmerjena v vzdrževanje notranje homeostaze roženice. V normalnem in vidnem polju najdemo posamezne aktivirane celice.

Živčna vlakna v sprednji stromi roženice so vidna kot svetli homogeni pasovi, ki pogosto tvorijo bifurkacije.

Descemetova membrana je običajno prozorna in je konfokalna mikroskopija ne vidi.

Zadnji epitelij je enoslojna plast šesterokotnih ali poligonalnih ploščatih celic z enakomerno svetlo površino na ozadju jasnih temnih medceličnih meja.

Naprava ima možnost ročnega ali samodejnega izračuna gostote celic, njihove površine in koeficienta variabilnosti.

Patološke spremembe v strukturi roženice

Za keratokonus so značilne znatne spremembe v sprednjem epiteliju in stromi roženice.

[ 12 ], [ 13 ], [ 14 ], [ 15 ], [ 16 ], [ 17 ], [ 18 ], [ 19 ], [ 20 ]